[发明专利]能够高效转化4AD特异性合成睾内酯酮和ADD的菌株及其应用

权利要求书

1.一株能够高效转化4AD特异性合成睾内酯酮和ADD的菌株，其特征在于，该菌株分离自蛇足石杉中的内生真菌，分类命名为Plectosphaerella cucumerina，指定名称为IA2，目前保存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC NO.11605，保藏日期为：2015年11月24日。

2.如权利要求1所述菌株的应用，其特征在于，该菌株以雄甾-4-烯-3,17-二酮为底物，将雄甾-4-烯-3,17-二酮转化生成17a-氧代-D-扩环-雄甾-1，4-二烯-3，17-二酮。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，菌株以雄甾-4-烯-3,17-二酮为底物，将雄甾-4-烯-3,17-二酮转化生成17a-氧代-D-扩环-雄甾-1，4-二烯-3，17-二酮，能高效特异性转化，得率92%以上。

4.如权利要求1所述菌株的应用，其特征在于，该菌株以雄甾-4-烯-3,17-二酮为底物，将雄甾-4-烯-3,17-二酮转化生成雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，菌株以雄甾-4-烯-3,17-二酮为底物，将雄甾-4-烯-3,17-二酮转化生成雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮，能高效特异性转化，得率90%以上。

6.如权利要求1所述菌株的应用，其特征在于，该菌株以雄甾-4-烯-3,17-二酮为底物，将雄甾-4-烯-3,17-二酮转化生成宝丹酮。

7.如权利要求1所述菌株的应用，其特征在于，该菌株以雄甾-4-烯-3,17-二酮为底物，将雄甾-4-烯-3,17-二酮转化生成睾内酯酮、雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮与宝丹酮。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的菌株转化雄甾-4-烯-3,17-二酮的方法如下：

1）将IA2菌种接种于种子培养基中，作为一级种子液，进行培养，待真菌菌丝长好后，将一级种子液转接到转化培养基中进行培养，投加雄甾-4-烯-3,17-二酮底物，使最终雄甾-4-烯-3,17-二酮底物的浓度为0.2-0.8g/L；

2）投加底物5天后，取出菌体发酵液，抽真空离心，收集滤液，萃取，减压旋蒸萃取液，得到粗制产物；

3）转化产物的分离：

将粗制产物加入氯仿，超声促溶，拌入硅胶粉，搅拌均匀，常温条件下风干，得到预分离物，将预分离物加入硅胶柱中，用二氯甲烷、乙酸乙酯两种有机溶剂进行梯度洗脱，分部收集；用TLC检测收集洗脱液，将含有相同组分的各流份合并，并减压浓缩，依次得到硅胶柱分离后的各个区段粗品，再经硅胶柱和HPLC分离，最终得到不同转化产物。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，HPLC分离时，5.021min、11.248min和16.805min三个转化产物分别为睾内酯酮、雄甾-1,4-二烯-3，17-二酮和宝丹酮。