[发明专利]一种可视化检测的等离子体纳米平台及其应用

权利要求书

1.一种可视化检测的等离子体纳米平台，其特征在于，包括以下组分：

1)发夹型核酸探针H2功能化的纳米纤维膜；发夹型核酸探针H2通过生物素-亲和素固载在纳米纤维膜上；所述发夹型核酸探针H2在纳米纤维膜上的固载浓度为0.7～1μmol/L；所述发夹型核酸探针H2的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.2所示；

2)发夹型核酸探针H1溶液；

所述发夹型核酸探针H1溶液为含有0.7～1μmol/L的发夹型核酸探针H1的反应液；所述反应液还包括以下含量组分：10～20mmol/LTris-HCl，5～10mmol/L MgCl₂和10～30mmol/L的KCl；所述反应液的pH为7～8；所述发夹型核酸探针H1的核苷酸序列如序列表中SEQIDNO.1所示；

3)浓度不低于120μM的H₂O₂的MES缓冲液；

4)1～6μmol/L的hemin溶液；

5)含有0.2～0.4mmol/L HAuCl₄的MES缓冲液；

6)100～120μmol/L的谷胱甘肽溶液。

2.根据权利要求1所述的等离子体纳米平台，其特征在于，所述纳米纤维膜为平均直径为100～1000nm且光滑的聚苯乙烯纳米纤维随机堆积形成的3D结构膜。

3.根据权利要求1所述的等离子体纳米平台，其特征在于，发夹型核酸探针H2功能化的纳米纤维膜的构建方法包括以下步骤：

1)配制聚合物溶液，搅拌24～26h，将得到的静电纺丝溶液纺丝1～3h，得到纳米纤维膜；所述聚合物溶液是包含质量分数为10～30％的聚苯乙烯、质量体积浓度为0.1～0.3％的TBAB的DMF溶液；

2)将所述步骤1)中纳米纤维膜在氩气等离子体氛围中处理1～6min，得到表面带有大量的含氧活性基团和负电荷的纳米纤维膜；

所述处理的条件如下：电压为30～60V，电流为1.8～3.6A；

3)将所述步骤2)中表面带有大量的含氧活性基团和负电荷的纳米纤维膜在等电点pI为10的亲和素溶液中浸泡1～2h，一次清洗，然后在生物素标记的发夹型核酸探针H2溶液中浸泡1～2h，二次清洗，得到发夹型核酸探针H2功能化的纤维膜。

4.根据权利要求3所述的等离子体纳米平台，其特征在于，所述步骤1)纺丝的条件如下：12～18kV电压，0.2～0.5mL/h进样速度，接收距离为7～12cm。

5.根据权利要求3或4所述的等离子体纳米平台，其特征在于，所述亲和素溶液的浓度为2.0～4.0μmol/L；所述生物素标记的发夹型核酸探针H2溶液的浓度为0.7～1.0μmol/L。

6.权利要求1～5任意一项所述的等离子体纳米平台在制备可视化检测HIV DNA单错配碱基和双错配碱基的试剂盒中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述可视化检测HIV DNA单错配碱基的方法包括以下步骤：

A.将发夹型核酸探针H1溶液和待测样本溶液混合，将发夹型核酸探针H2功能化的纳米纤维膜在得到的混合液中浸泡15～17h，清洗，再在1～6μmol/L的hemin溶液中浸泡1.5～2.5h，清洗，得到DNAzyme纳米纤维膜；

B.将所述DNAzyme纳米纤维膜在H₂O₂浓度不低于120μM的MES缓冲液中反应30～40min，再加入含有0.2～0.4mmol/L HAuCl₄的MES缓冲液反应20～25min后，再加入100～120μmol/L的谷胱甘肽溶液，紫外可见分光光度计来检测靶标DNA的吸光度值；根据吸光度值计算待测样品溶液中HIV DNA的浓度。