[发明专利]利用高浓度豆腐废水培养两株小球藻生产多糖的研究方法

权利要求书

1.利用高浓度豆腐废水培养两株小球藻生产多糖的研究方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)小球藻接种：

(1)将小球藻L166和L38分别接种于容器内；

(2)添加BG-11培养基；

(3)接种体积为8-10.5％(V_接种物/V_培养基)；

(4)置于光培养箱中培养7-10天：培养条件为温度22-25℃，白色荧光照明4000-6000Lx并通入0.5-1.0L.min^-1的过滤灭菌空气条件下培养；

2)废水预处理：

(1)将豆腐废水离心、过滤并进行100-121℃高压灭菌处理；

(2)将灭菌后的豆腐废水分别稀释10倍和100倍，向12个锥形瓶中分别加入不同稀释倍数的豆腐水样200ml，每个稀释浓度设置6个样品；

3)小球藻培养：

在6个稀释10倍的豆腐废水样品中分别接种两种小球藻L166和L38各3瓶，控制初始吸光度为0.1±0.05；

在6个稀释100倍的豆腐废水样品中分别接种两种小球藻L166和L38各3瓶，控制初始吸光度为0.1±0.05；

培养条件为：温度培养条件22-25℃，白色荧光照明4000-6000Lx；

4)测定小球藻多糖。

2.根据权利要求1所述的利用高浓度豆腐废水培养两株小球藻生产多糖的研究方法，其特征在于，所述步骤4)测定小球藻多糖的具体步骤如下：

(1)培养20-25天后，取各个稀释倍数豆腐废水培养条件下的小球藻样品L166和L38各20ml，转速5000rpm离心20min，弃上清液；

(2)将底部微藻固体在105℃下24h烘干，研磨成粉末状；

(3)取样品20mg，加入蒸馏水约3.0ml，在100℃下水浴2h；

(4)取上清液2.0ml，转速5000rpm离心20min，再通过真空泵中速滤纸过滤；

(5)取1.25ml滤液加入8.75ml无水乙醇于4℃下沉淀12h；

(6)将乙醇沉淀后的样品离心在转速5000rpm离心20min，舍弃上清液并将沉淀物溶于2.0ml蒸馏水中，充分摇匀；

(7)分别取1.0、0.5、0.2、0.1ml多糖水溶液稀释至1.0ml；

(8)使用移液管分别加入5％苯酚0.5ml及浓硫酸2.5ml；

(9)充分摇匀后放入100℃水浴锅中20min，冷却至室温；

(10)在490nm处进行紫外分光光度法测定，根据吸光度查找标准曲线计算多糖生产率(mg/L/d)：

3.根据权利要求1所述的利用高浓度豆腐废水培养两株小球藻生产多糖的研究方法，其特征在于，所述步骤2)中豆腐废水原始水质：化学需氧量22.7±0.74g/L，总氮0.95±0.05mg/L，总磷0.12±0.007g/L。