[发明专利]利用高浓度豆腐废水培养小球藻L166生产多糖和油脂的优化方法

权利要求书

1.利用高浓度豆腐废水培养小球藻L166生产多糖和油脂的优化方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)小球藻接种：

(1)将小球藻L166接种于容器内；

(2)添加BG-11培养基；

(3)接种体积比为10％(V_接种物/V_培养基)；

(4)置于光培养箱中培养10天：培养条件为温度22℃，白色荧光照明6000Lx并通入1.0L.min^-1的过滤灭菌空气条件下培养；

2)废水预处理：

(1)将豆腐废水离心、过滤并进行121℃高压灭菌处理；

(2)将灭菌后的豆腐废水稀释10倍，向3个锥形瓶中分别加入不同稀释倍数的豆腐水样200ml；

(3)调节pH为7；

3)小球藻培养：

在3个稀释10倍的豆腐废水样品中接种小球藻L166，控制初始吸光度为0.1；培养条件为：温度22℃，白色荧光照明6000Lx；

4)测定小球藻油脂；

5)测定小球藻多糖。

2.根据权利要求1所述的利用高浓度豆腐废水培养小球藻L166生产多糖和油脂的优化方法，其特征在于，所述步骤4)测定小球藻油脂的具体步骤如下：

(1)培养25天后，取2.55mL稀释10倍豆腐废水培养下的小球藻L166藻液，添加450μL二甲基亚砜及1mg/mL溶于丙酮的尼罗红溶液24μL；

(2)在恒温水浴振荡器中200rpm充分震荡混匀；

(3)在30℃暗室静置10min；

(4)选取580nm作为激发荧光检测波长进行测定，根据荧光值查找标准曲线计算油脂生产率(mg/L/d):

3.根据权利要求1所述的利用高浓度豆腐废水培养小球藻L166生产多糖和油脂的优化方法，其特征在于，所述步骤5)测定小球藻多糖的具体步骤如下：

(1)培养25天后，取稀释10倍豆腐废水培养下的小球藻L166藻液20ml，转速5000rpm离心20min，弃上清液；

(2)将底部微藻固体在105℃下24h烘干，研磨成粉末状；

(3)取样品20mg，加入蒸馏水约3.0ml，在100℃下水浴2h；

(4)取上清液2.0ml，转速5000rpm离心20min，再通过真空泵中速滤纸过滤；

(5)取1.25ml滤液加入8.75ml无水乙醇于4℃下沉淀12h；

(6)将乙醇沉淀后的样品离心在转速5000rpm离心20min，舍弃上清液并将沉淀物溶于2.0ml蒸馏水中，充分摇匀；

(7)分别取1.0、0.5、0.2、0.1ml多糖水溶液稀释至1.0ml；

(8)使用移液管分别加入5％苯酚0.5ml及浓硫酸2.5ml；

(9)充分摇匀后放入100℃水浴锅中20min后冷却至室温；

(10)在490nm下进行紫外分光光度法测定，根据吸光度查找标准曲线计算多糖生产率(单位：mg/L/d)：

4.根据权利要求1所述的利用高浓度豆腐废水培养小球藻L166生产多糖和油脂的优化方法，其特征在于，所述步骤2)中豆腐废水原始水质：化学需氧量22.7±0.74g/L，总氮0.95±0.05mg/L，总磷0.12±0.007g/L。