[发明专利]利用牛奶厂高浓度有机废水培养绿藻A.dimorphus制取脂质和多糖的方法

权利要求书

1.利用牛奶厂高浓度有机废水培养绿藻A.dimorphus制取脂质和多糖的方法，其特征在于，使用原始牛奶厂废水而不需要稀释或灭菌，包括如下步骤：

1)废水的预处理：牛奶废水经过滤后置于4℃冷藏保存，不进行任何稀释或灭菌处理；

2)绿藻A.dimorphus的培养：向三个1L锥形瓶中分别加入未经灭菌和稀释的原始牛奶废水500ml，分别接种体积为8-10％(V_接种物/V_培养基)的活性绿藻A.dimorphus，控制吸光度为0.5-1.0；

培养条件：温度34-36℃，光强度为60-70μmol/m²·s的冷白荧光灯，光暗比为12:12h条件下培养8-10天且每天进行3-4次摇瓶；

3)绿藻A.dimorphus中脂质的测定；

4)绿藻A.dimorphus中多糖的测定。

2.根据权利要求1所述的利用牛奶厂高浓度有机废水培养绿藻A.dimorphus制取脂质和多糖的方法，其特征在于，所述步骤3)绿藻A.dimorphus中脂质的测定具体步骤如下：

(1)取绿藻样品离心，弃上清液；

(2)取绿藻固体在60-70℃下烘干至恒重，并称量绿藻细胞干重；

(3)用氯仿-甲醇混合溶剂(1:2，V/V)从烘干后的200mg绿藻样品中萃取脂质；

(4)在室温下超声波作用2-5min，4-5次，再离心分离；

(5)将上清液过滤后转移至预先称重的玻璃烧杯中，在60℃的烘箱中蒸发溶剂；

(6)通过称重测定脂质质量，计算脂质含量：

脂质含量(％)：

3.根据权利要求1所述的利用牛奶厂高浓度有机废水培养绿藻A.dimorphus制取脂质和多糖的方法，其特征在于，所述步骤5)绿藻A.dimorphus中多糖的测定具体步骤如下：

(1)培养8-10天后，取50ml绿藻样品，在转速9000rpm下离心5min，弃上清液；

(2)取绿藻固体在60℃下烘干至恒重，并称量绿藻细胞干重；

(3)将烘干的绿藻固体研磨成粉末状，在200mg绿藻样品加入蒸馏水30ml，在100℃下水浴2h；

(4)取上清液20ml，转速9000rpm离心5min，再通过真空泵中速滤纸过滤；

(5)取2ml滤液加入6ml无水乙醇于4℃下沉淀12h；

(6)将乙醇沉淀后的样品离心，转速9000rpm离心5min，舍弃上清液；

(7)将沉淀物溶于2ml蒸馏水中，充分摇匀；

(8)分别取1.0、0.5、0.2、0.1ml多糖水溶液稀释至1.0ml；

(9)使用移液管分别加入5％苯酚0.5ml及浓硫酸2.5ml，充分摇匀；

(10)放入100℃水浴锅中20min，冷却至室温；

(11)在490nm处进行紫外分光光度法测定，根据吸光度查找标准曲线计算多糖含量：

多糖含量(％)：

4.根据权利要求1所述的利用牛奶厂高浓度有机废水培养绿藻A.dimorphus制取脂质和多糖的方法，其特征在于，所述步骤1)中牛奶废水原始水质：磷酸盐5.96±0.04mg/L，氨氮277.40±10.75mg/L,化学需氧量2593.33±277.37mg/L,总有机碳116.23±4.3,总无机碳373.20±5.47mg/L。