[发明专利]一种早梨愈伤组织诱导和分化的方法

说明书

早梨愈伤组织诱导和分化的方法：用四种含有碳纳米管的培养基依次对早梨叶片进行愈伤组织诱导和分化，120‑240d后，可形成较多的试管苗。本发明与现有技术比较，早梨愈伤组织诱导和分化快，且形成的试管苗数量多。

技术领域：

本发明涉及一种植物愈伤组织诱导和分化的方法，确切地说是一种早梨愈伤组织诱导和分化的方法。

背景技术：

上饶早梨为蔷薇科蔷薇属植物，主要品种有六月雪和黄皮消等，在江西上饶县主要分布在花厅镇和田墩镇等乡镇。上饶早梨，成熟早，且表皮薄、果肉嫩、香甜可口，具有生津润肺、清热化痰、解热消暑之功效，老少皆宜。上饶早梨营养丰富，据测定，100g含8g苹果酸、8g葡萄糖、10g碳水化合物、1g蛋白质、0.1g脂肪、5mg钙、6mg磷。上饶早梨不但可以鲜食，还可作为中成药“雪梨膏”的绝佳原料。近年来，上饶早梨的种植业已经得到迅速的发展，上饶早梨的农业产业化龙头企业不断增加，上饶早梨生产基地达2.2万亩，产量达三万多吨。但由于上饶早梨是江西早熟梨的特优地方品种，分布范围较窄，道地性野生资源较少。采用植物组织培养技术可以快速繁殖上饶早梨种苗，实现其工厂化生产。愈伤组织诱导和分化是植物种苗快繁的一个有效途径，但目前梨愈伤组织的诱导和分化效率不高，褐化较为严重，再生能力不强，无法真正通过愈伤组织的诱导和分化来实现梨种苗的规模化培育。针对这些问题，本发明开发了一种早梨愈伤组织诱导和分化的方法，可为上饶早梨试管苗的工业化生产长期提供技术基础。

发明内容：

本发明的目的是提供一种褐化减少、成活率高、脱毒效果好的早梨愈伤组织诱导和分化的方法。实现本发明目的的技术方案是，一种早梨愈伤组织诱导和分化的方法，其特征在于有以下步骤：(1)在超净工作台内，切取早梨试管苗叶片，并将其背面朝上接种于培养基一(MS+2-3mg/L噻苯隆+0.3-0.5mg/L IBA+0.3-0.5g/L碳纳米管+30g/L蔗糖+7.5g/L琼脂)，接种后将材料放入培养室进行常规条件黑暗培养，培养室的温度为25±2℃；(2)在培养基一上培养30-60d后，将早梨愈伤组织转入培养基二(MS+1-2mg/L噻苯隆+0.2-0.5mg/LIBA+0.3-0.5g/L碳纳米管+0.3-0.5g/L石墨烯量子点+30g/L蔗糖+7.5g/L琼脂)，接种后将材料放入培养室进行常规条件培养，培养室培养条件为：温度25±2℃，光照时间16h/d，光强1500-2500lx；(3)在培养基二上培养30-60d后，将早熟梨单芽转入培养基三(MS+1-2mg/L噻苯隆+0.2-0.5mg/L IBA+0.3-0.5g/L碳纳米管+30g/L蔗糖+7.5g/L琼脂)，接种后将材料放入培养室进行常规条件培养，培养室培养条件为：温度25±2℃，光照时间16h/d，光强1500-2500lx；(4)在培养基三上培养30-60d后，将早熟梨不定芽转入培养基四(1/2MS+0.5-1mg/L IBA+0.1-0.3mg/L PP₃₃₃+0.3-0.5g/L碳纳米管+30g/L蔗糖+7.5g/L琼脂)，接种后将材料放入培养室进行常规条件培养，培养室培养条件为：温度25±2℃，光照时间16h/d，光强1500-2500lx；(5)在培养基四上培养30-60d后，早熟梨不定芽生根，形成完整的健壮试管苗。

具体实施方式：

结合下述实施例对本发明作进一步说明：

(1)愈伤组织诱导

在超净工作台内，切取早梨试管苗叶片，并将其背面朝上接种于培养基一(MS+2-3mg/L噻苯隆+0.3-0.5mg/L IBA+0.3-0.5g/L碳纳米管+30g/L蔗糖+7.5g/L琼脂)，接种后将材料放入培养室进行常规条件黑暗培养，培养室的温度为25±2℃；

(2)愈伤组织分化出芽