[发明专利]一种早梨茎尖离体培养的方法

说明书

早梨茎尖离体培养的方法：用四种含有石墨烯量子点的培养基依次对早梨茎尖进行培养，180‑270d后，可形成完整的健壮试管苗。本发明与现有技术比较，早梨茎尖褐化显著减少、成活率高，且形成的试管苗脱毒效果好，生长健壮，易于移栽。

技术领域：

本发明涉及一种植物茎尖离体培养的方法，确切地说是一种早梨茎尖离体培养的方法。

背景技术：

上饶早梨产自江西省上饶县。上饶县是一个以丘陵为主的山区县，无重大工业污染源，生态环境优良，非常适合种植上饶早梨。上饶早梨果大皮薄，色白光滑，肉质细嫩，汁多渣少，味甜微酸，酥脆可口，隔夜不黄，并含矿物质、胡萝卜素和维生素B、维生素C等多种营养元素，具有生津润肺、清热化痰、解热消暑等功效。据《信州府志》记载，花厅产的上饶早梨早在清朝就以地方特产而上贡皇宫，栽培历史已有400余年。六月雪、黄皮消等主要地方品种统称为上饶早梨，尤以六月雪为上饶梨果之最，2005年，在江西首届赣北早梨节获金奖，2009年，在中国(衢州)农博会上获“华东十大精品水果”称号。2012年，上饶早梨获批为国家农产品地理标志产品。目前，真正的上饶早梨(如六月雪和黄皮消)现已少有栽培，多为几十年乃至百年老树，仅上饶县花厅镇和田墩镇部分地方还有少量栽培，但存在病毒病害严重、果实产量下降、不耐贮藏、种性退化、品质变劣等问题，有的甚至整株死亡而绝收，严重影响了上饶早梨生产。此外，病毒病还影响上饶早梨苗木质量，引起砧穗不亲和及苗木根系发育不良，并终生带毒，持久为害。病毒类病害已经成为上饶早梨高产优产的严重障碍，应设法从根本上消除病毒病的为害。茎尖脱毒技术是农业高新技术中最重要、最活跃的领域之一，它不仅是农业可持续发展的基础，而且是生物技术中应用最广、最具现实意义的领域，被誉为农业发展史上的第四次绿色革命。国内外许多研究结果已证明茎尖组织培养有一定的脱毒效果，茎尖培养脱毒原理是利用病毒在植物体内分布不均匀性，越靠近茎顶端分生区域，病毒浓度也越低，即根尖和芽尖的分生组织含病毒量少或不含病毒。因此，根据茎尖存在无病毒区，在无菌条件下切取植物茎尖进行离体培养，可以获得不带病毒的植株。茎尖脱毒培养的两个关键技术环节是茎尖的成活率和脱毒率，褐化是降低茎尖培养成活率的首要因素。褐化的发生与许多因素有关，茎尖大小、取材季节、培养方式、激素浓度、基本培养基、培养基添加物等都对茎尖褐化有影响，例如茎尖越小，褐化越严重，成活率越低。针对这些问题，本发明开发了一种早梨茎尖离体培养的方法，可为上饶早梨脱毒苗的大规模生产长期提供技术基础。

发明内容：

本发明的目的是提供一种褐化减少、成活率高、脱毒效果好的早梨茎尖离体培养的方法。实现本发明目的的技术方案是，一种早梨茎尖离体培养的方法，其特征在于有以下步骤：(1)在超净工作台内，切取0.2-0.3mm早梨茎尖并将其接种于培养基一(MS+0.3-0.5g/L石墨烯量子点+30g/L蔗糖+0g/L琼脂)，接种后将材料放入培养室进行常规条件黑暗培养，培养室的温度为25±2℃；(2)在培养基一上培养7-10d后，将早梨茎尖转入培养基二(MS+1-2mg/L噻苯隆+0.1-0.3mg/LNAA+0.3-0.5g/L石墨烯量子点+30g/L蔗糖+7.5g/L琼脂)，接种后将材料放入培养室进行常规条件培养，培养室培养条件为：温度25±2℃，光照时间16h/d，光强1500-2500lx；(3)在培养基二上培养60-90d后，将早梨单芽转入培养基三：MS+1-2mg/L噻苯隆+0.1-0.3mg/LNAA+0.3-0.5g/L石墨烯量子点+30g/L蔗糖+7.5g/L琼脂，接种后将材料放入培养室进行常规条件培养；(4)在培养基三上培养60-90d后，将早梨不定芽转入培养基四(1/2MS+0.5-1mg/L NAA+0.3-0.5g/L石墨烯量子点+30g/L蔗糖+7.5g/L琼脂)，接种后将材料放入培养室进行常规条件培养，培养室培养条件为：温度25±2℃，光照时间16h/d，光强1500-2500lx；(5)在培养基四上培养60-90d后，早梨不定芽生根，形成完整的健壮试管苗。

具体实施方式：

结合下述实施例对本发明作进一步说明：

(1)第一次培养