[发明专利]利用单细胞PCR检测细胞遗传稳定性的方法在审
| 申请号： | 201810446767.5 | 申请日： | 2018-05-11 |
| 公开（公告）号： | CN108611406A | 公开（公告）日： | 2018-10-02 |
| 发明（设计）人： | 董慧芳;徐嘉文;邱沛然;汤传龙;蔡洁行;周伟昌;陈智胜 | 申请（专利权）人： | 上海药明生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686 |
| 代理公司： | 上海浦一知识产权代理有限公司 31211 | 代理人： | 戴广志 |
| 地址： | 200131 上海市浦东新区中国（上海*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基因拷贝数 遗传稳定性 细胞遗传 裂解 单细胞水平 细胞 扩增产物 流式细胞 微观水平 样品提取 药品研发 均一性 细胞株 异质性 预扩增 质量控制 分选 高通 构建 蛋白 筛选 衡量 检测 生产 | ||
1.利用单细胞PCR检测细胞遗传稳定性的方法，其特征在于，步骤包括：
1)流式细胞进行单细胞分选及裂解；
2)对裂解后的样品提取DNA进行目标基因预扩增；
3)对预扩增产物进行目标基因及内参基因的qPCR；
4)根据基因拷贝数的变化衡量细胞的遗传稳定性。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述单细胞为中国仓鼠卵巢细胞。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)，裂解方法为：25-55℃裂解，然后在65-100℃失活。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)，裂解所用缓冲液的成分包括0.1％-5.0％蛋白酶K和0.001％-0.5％SDS。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)，预扩增引物包括目标基因正向引物和反向引物。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)，预扩增PCR反应条件为：90-95℃2-12min；90-95℃10-120s，50-65℃30-180s，68-72℃30-180s，共3-30个循环。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)，qPCR反应条件为：90-95℃2-12min；90-95℃10-120s，50-65℃30-180s，68-72℃30-180s，共20-50个循环。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)，根据基因拷贝数的变化，用目标基因丢失率、两组Ct平均值的差值、样品标准差三个指标衡量细胞的遗传稳定性。
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