[发明专利]一种用于富集净化真菌毒素的固相萃取柱及其制备方法

说明书

本发明公开了一种用于富集净化牛奶中真菌毒素的固相萃取柱，该固相萃取柱是以石墨烯合金复合材料为填料制备的。本发明的固相萃取柱可以同时富集净化牛奶中的九种真菌毒素，且价格便宜，操作简单。

技术领域

本发明涉及农副产品安全检测技术领域，具体地说涉及一种用于富集净化真菌毒素的固相萃取柱及其制备方法。

背景技术

真菌毒素是由真菌产生的有毒次级代谢物，对人和动物具有细胞毒性、免疫毒性、生殖毒性、神经毒性和三致(致癌、致畸及致突变)作用。真菌毒素不仅污染饲料和农作物，也可通过摄入被污染饲料的动物，将毒素及其代谢产物转移到动物源性食品中(如牛奶，肉等)，是影响其安全性的重要因素之一。目前黄曲霉毒素B₁(AFB₁)、黄曲霉毒素M₁(AFM₁)、赭曲霉毒素A(OTA)、玉米赤霉烯酮(ZEA)、α-玉米赤霉烯醇(α-ZOL)、β-玉米赤霉烯醇(β-ZOL)、玉米赤霉酮(ZAN)、α-玉米赤霉醇(α-ZAL)及β-玉米赤霉醇(β-ZAL)九种真菌毒素均有报道在牛奶中微量存在。

而现有的关于牛奶中真菌毒素的富集净化方法主要是采用固相萃取柱，商业化的固相萃取柱主要为HLB柱、免疫亲和柱等。但是，商品化的免疫亲和柱价格非常昂贵，单支价格甚至达到150-180元，且只针对某一种或者一类毒素。即使最为便宜的HLB柱，单支价格也要20元左右。

因此，需要开发一种价格低廉的固相萃取柱，可以有效的用来对牛奶中九种真菌毒素同时富集净化。

发明内容

本发明的目的首先在于提供一种用于富集净化牛奶中真菌毒素的固相萃取柱，该固相萃取柱是以石墨烯合金复合材料为填料；

其中所述的石墨烯合金复合材料是通过如下方法制备得到的：

第一步制备金纳米粒子溶液：四氯金酸三水合物水溶液和L-抗坏血酸溶液按1:4～6的体积比混合，室温下反应1-3min；然后加入1％的柠檬酸钠水溶液终止反应，离心收集残渣，水复溶残渣，超声振荡制备得到金纳米粒子溶液；

第二步制备还原型氧化石墨烯：将氧化石墨烯(GO)溶于水并调节pH至10，加入L-抗坏血酸(二者重量比1:3～3:1)，70-90℃条件下搅拌3-5小时，将得到的分散液离心，收集残渣，水复溶残渣得到还原型氧化石墨烯分散液；

第三步合成复合材料：在搅拌的情况下，依次加入还原型氧化石墨烯分散液和金纳米粒子溶液(二者体积比2～4:1)，反应10-60min；最后将混合液放置-20℃过夜保存，冷冻干燥后得到石墨烯合金复合材料。

本发明还提供了上述固相萃取柱的制备方法，该方法为：

将石墨烯合金复合材料与水(1/1-4/1,m/m)混合，超声20-60min制备分散液，采用湿法装柱；

所采用的填充柱体积为0.1-1000mL，内径为0.1-50cm；底部有一块筛板，筛板厚度1-5mm。

本发明还提供了上述固相萃取柱用于富集净化牛奶中九种真菌毒素的方法，该方法包括如下步骤：

待测牛奶样品经提取氮吹后，复溶，然后通过上述固相萃取柱，再经淋洗液淋洗，最后洗脱，收集洗脱液浓缩即获得目标物。

该方法可以同时富集净化牛奶中的AFB₁、AFM₁、OTA、ZEA、α-ZOL、、β-ZOL、ZAN、α-ZAL和β-ZAL九种真菌毒素。

具体的说，用本发明的固相萃取柱富集净化牛奶中九种真菌毒素的方法，包括如下步骤：