[发明专利]一种水稻细菌性穗枯病菌快速高效分离方法

说明书

一种水稻细菌性穗枯病菌快速高效分离方法，属于微生物技术领域。其特征在于包括以下步骤：取菌悬液涂布至含氨苄青霉素的KB培养基中，25℃或40℃下培养，即可分离水稻细菌性穗枯病菌。上述的一种水稻细菌性穗枯病菌快速高效分离方法，设计合理，通过该方法能够快速、准确、有效地分离到水稻细菌性穗枯病菌，方便后续分子生物学研究。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种水稻细菌性穗枯病菌（颖壳伯克氏菌Burkholderia glumae）快速高效分离方法。

背景技术

水稻细菌性穗枯病（bacterial panicle blight of rice，BPBR）是由颖壳伯克氏菌Burkholderia glumae引起的一种细菌性病害。病原菌能产生毒黄素，毒害寄主植物。主要使水稻秧苗腐烂、谷粒以及叶鞘褐变（故又被称水稻苗腐病、谷枯病和颖枯病），造成水稻减产，毒黄素还会严重影响稻米品质，危害人类以及其他动物的健康。

水稻细菌性穗枯病最先在日本报道，随后在亚洲、美洲、欧洲以及非洲等各水稻种植区暴发流行，给全世界的水稻生产造成严重威胁，已引起人们的高度重视。该病在我国早期已有报道，简锦忠1984年在台湾省中南部的稻田发现穗枯病；王昌家等2006年在黑龙江省佳木斯地区发现该病，且处于零星初发生阶段；罗金燕等于2008年从2份浙江省稻种（来自海南的籼稻）上分离到了B. glumae，表明表面看似健康的稻种也可能带有穗枯病菌。近年，根据本实验室调查（未发表的资料），全国北从黑龙江建三江南到海南省三亚，西从四川东到台湾省，稻田中均有发现水稻穗枯病发生、危害，个别稻区、年份发生面积大、危害严重。据2017年10月在广西容县罗江镇、石头镇等15个乡镇调查，‘犇优9901’、‘晶两优华占’、‘y两优1998’、‘隆两优1988’、‘隆两优黄莉占’、‘隆两优534’等全县大多数品种水稻穗枯病都有不同程度发生，发生面积约500 hm²，一般病穗率6.5%～20%，严重的30%～50%（实际调查结果，尚未发表）。因此，建立该病原菌的准确、快速、高效的分离体系尤为重要。PCR、Real-time PCR、双重PCR等分子生物学技术在病原菌分离鉴定中应用越来越广泛。但是，在运用分子生物学技术鉴定之前，通常由于杂菌太多，工作量大不容易分离到目标菌。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种水稻细菌性穗枯病菌快速高效分离方法的技术方案。

所述的一种水稻细菌性穗枯病菌快速高效分离方法，其特征在于包括以下步骤：取菌悬液涂布至含氨苄青霉素的KB培养基中，25℃或40℃下培养，即可分离水稻细菌性穗枯病菌。

所述的一种水稻细菌性穗枯病菌快速高效分离方法，其特征在于所述的菌悬液通过以下步骤得到：取病样用70%乙醇对病样进行表面消毒15s，无菌蒸馏水冲洗3遍，灭菌剪刀将病样剪碎，加入1 mL无菌蒸馏水浸泡10 min，即得到菌悬液。

所述的一种水稻细菌性穗枯病菌快速高效分离方法，其特征在于使用氨苄青霉素为选择抗生素，氨苄青霉素能够抑制其它细菌的生长，而目标细菌水稻细菌性穗枯病病原菌对氨苄青霉素耐受性高，所述的氨苄青霉素的含量为50 µg/mL。

所述的一种水稻细菌性穗枯病菌快速高效分离方法，其特征在于所述的培养时间为36h。

上述的一种水稻细菌性穗枯病菌快速高效分离方法，设计合理，通过该方法能够快速、准确、有效地分离到水稻细菌性穗枯病菌，方便后续分子生物学研究。

附图说明

图1为不同温度条件下LMG 2196的生长曲线；

图2为不同温度条件下培养48 h的LMG2196；