[发明专利]一种酱油中酪胺含量的检测方法

权利要求书

1.一种酱油中酪胺含量的检测方法，其特征在于该方法包括下列步骤：

(a)样品溶液的预处理：取待检测酱油样品5mL用去离子水稀释10倍，微孔滤膜0.22μm过滤，滤液4℃保存备用；

(b)样品的衍生化反应：从滤液中取100μL样品，加入50μg·mL^-1内标溶液100μL，再依次加入用氢氧化钠调整pH值为10的饱和碳酸氢钠100μL，用丙酮配制的8mg·mL^-1丹磺酰氯200μL，在55℃下避光进行衍生化反应，反应15min；结束后加氨水100μL终止反应25min，加乙腈定容到1mL，微孔滤膜0.22μm过滤，滤液上柱检测；

(c)UPLC的检测条件：采用Waters Acquity Ⅰ-Class超高效液相色谱仪，C18，2.1×50mm，1.7μm色谱柱，流动相为去离子水和乙腈，流速0.3mL·min^-1，紫外检测波长254nm，进样量10μL，柱温55℃，流动相A为乙腈，流动相B为去离子水，检测器：PDA检测器；

UPLC的洗脱程序为：流动相A为乙腈，流动相B为去离子水，采用梯度洗脱，在0-20min,A50-85％,B50-15％,20-21min,A85-50％，B15-50％，21-25min，A50％，B50％；

(d)将步骤(c)测定数值代入酪胺标准品线性回归方程中计算，得到酱油样品中酪胺的含量；

酪胺标准品线性回归方程:精密称取酪胺100mg放于100mL棕色容量瓶中，用0.1M盐酸定容至刻度，即得浓度为1mg·mL^-1的酪胺标准溶液，微孔滤膜0.22μm过滤，4℃保存备用；精密称取内标苯甲胺的质量100mg放于100mL容量瓶中，用去离子水配制成浓度为1mg·mL^-1的溶液，再继续用去离子水稀释到浓度为50μg·mL^-1的溶液，微孔滤膜0.22μm过滤，4℃保存备用；

将浓度为1mg·mL^-1的酪胺标准溶液用0.1M盐酸配制浓度梯度为50、100、200、300、400、500μg·mL^-1的标准工作溶液，每个浓度的标准工作溶液的内标苯甲胺的浓度为50μg·mL^-1；分别按步骤(b)进行衍生化反应，经0.22μm滤膜过滤后，取适量采用UPLC进行检测，UPLC法条件同步骤(c)；以峰面积的比值一浓度作为线性回归，得到酪胺标准品的线性回归方程。