[发明专利]新城疫病毒抗体检测试剂盒

说明书

本发明涉及新城疫病毒抗体检测试剂盒。本发明的检测试剂盒包括一个或多个固体载体，以及独立地连接于所述一个或多个固体载体上的特定多肽或多肽组合。

技术领域

本发明主要涉及禽用试剂盒及诊断方法。具体而言，本发明涉及可用于对新城疫抗体检测的试剂盒以及检测方法。

背景技术

新城疫(ND)是由NDV(Newcastle disease virus,新城疫病毒)引起的一种极易传染的毁灭性疾病，其死亡率常高达100％，广泛分布于许多国家,OIE将其列为A类疫病。本病的典型特征是呼吸道、消化道粘膜出血，人也有易感性。本病在1926年最早发现于印度尼西亚的巴塔维亚，同年发现于英国新城，因此而得名。

NDV为副黏病毒科副黏病毒属(Avulavirus)的禽副黏病毒I型(APMV-1)。该病毒具有囊膜结构，基因组为单股负链不分节段的RNA病毒，由6种结构蛋白组成，分别为NP、P、M、F、HN和L蛋白。NP蛋白为核衣壳蛋白，氨基酸保守性较高，大部分NDV病毒在NP蛋白443-460位置都具有一高度保守的B细胞表位；P蛋白是病毒RNA合成的必需因子；M、F和HN蛋白与病毒囊膜的形成相关；F蛋白(融合蛋白)和HN蛋白(血凝素神经氨酸酶蛋白)是病毒的主要免疫原性蛋白，可以诱导机体产生中和抗体。F蛋白介导病毒与宿主细胞的膜融合，其蛋白裂解位点与病毒毒力有关。HN蛋白具有神经氨酸酶及促进融合等作用；此外，该蛋白还与病毒毒力相关。L蛋白为病毒最大的蛋白，它在NDV6种结构蛋白中最为保守，具有RNA聚合酶、转录后修饰等生物学活性，可与NP和P蛋白共同构成病毒复制复合体，该复合体参与病毒基因组的转录和复制。

目前，新城疫的实验室检测技术主要包括：常规分离鉴定，血清学方法(血凝试验(HA)、血凝抑制试验(HI)、琼脂扩散实验(AGP)、荧光抗体技术(FA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、病毒中和试验(VNT)、乳胶凝集试验(LAT)、神经氨酸酶试验(NIT)、放射免疫试验(RIA)，分子生物学方法(RNA指纹图谱、核酸探针技术、RT-PCR技术)等。这其中，酶联免疫测定的特异性和敏感性较高且适合检测大量样品，因此，被广泛应用于新城疫病毒抗体的检测。

用于新城疫病毒抗体检测的酶联免疫测定方法主要包括竞争酶联免疫测定(c-ELISA)、阻断酶联免疫测定(b-ELISA)和间接阻断酶联免疫测定。c-ELISA和b-ELISA的特异性和敏感性都比较高，是被临床普遍接受的新城疫病毒抗体检测方法。但是，c-ELISA和b-ELISA均需使用单克隆抗体，这造成检测成本大幅提高；而且，c-ELISA和b-ELISA的操作繁琐、检测时间长、判据复杂。另一方面，传统的间接ELISA使用源自新城疫病毒的完整蛋白或重组蛋白作为包被抗原来检测血清中的抗体，其成本低于c-ELISA和b-ELISA；但是，由于该方法使用完整蛋白作为抗原，容易发生抗体的错误识别和非特异性识别，因此，其特异性和敏感性都不及c-ELISA和b-ELISA。

因此，需要开发出检测成本低、检测时间短、操作简便、特异性和敏感性高的新城疫病毒抗体检测试剂盒。

发明内容

鉴于上述现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种检测成本低、检测时间短、操作简便、特异性和敏感性高的新城疫病毒抗体检测试剂盒，以及能够用于制备该试剂盒的多肽或多肽组合。

发明人为解决上述技术问题进行了深入研究，结果发现，当用SEQ ID NO：1～5所示的多肽组合检测新城疫病毒抗体时，敏感性为86％、特异性为100％，完全可以与c-ELISA方法和b-ELISA方法媲美。

因此，本发明包括：

1.一种新城疫病毒抗体(IgY)检测试剂盒，其包括一个或多个固体载体，以及独立地连接于所述一个或多个固体载体上的下述多肽组合1；

多肽组合1

SEQ ID NO：1所示的多肽，