[发明专利]一种高效液相色谱手性流动相法分离盐酸达卡他韦及其五种光学异构体

说明书

本发明公开了一种高效液相色谱手性流动相法分离盐酸达卡他韦及其五种光学异构体。本发明发现，将L‑天门冬氨酸、(2R,3R)‑双正丙基酒石酸、D‑(+)‑二对甲基苯甲酰酒石酸、(1R,2R)‑(‑)‑N‑(对甲基苯磺酰基)‑1,2‑二苯基乙二胺或L‑缬氨酰‑L‑酪氨酸作为添加剂添加到流动相中使用普通的C18液相色谱柱即可有效分离盐酸达卡他韦及其五种光学异构体，两两均达到基线分离。本领域技术人员知道，手性流动相法非常局限，仅仅可以分离有限的化合物，而且没有系统的理论指导何种化合物可以通过手性流动相法进行分离，只能通过“试错法”反复尝试和毫无章法的摸索。因此，本发明提供的方法对于本领域技术人员而言是非显而易见的，具备专利法规定的创造性。

技术领域

本发明属于医药领域，涉及药物分析，具体涉及一种高效液相色谱手性流动相法分离盐酸达卡他韦及其五种光学异构体。

背景技术

盐酸达卡他韦(daclatasvir dihydrochloride，1)，化学名为N,N'-[[1,1'-联苯]-4,4'-二基双 [1H-咪唑-5,2-二基-(2S)-2,1-吡咯烷二基[(1S)-1-(1-甲基乙基)-2-氧代-1,2-乙烷二基]]]二氨基甲酸二甲酯二盐酸盐，是一种非结构蛋白5A(NS5A)抑制剂，为抗丙型肝炎病毒药物。

1(aS,bS,cS,dS型)含有4个手性中心。据文献报道(中国专利，CN101778841A，用于合成用于治疗丙型肝炎的化合物的方法)，1的制备过程中会产生5个手性异构体，分别为2(aR,bS,cS,dS型)、3(aS,bS,cR,dS型)、4(aR,bS,cS,dR型)、5(aS,bR,cR,dS 型)和6(aR,bR,cR,dR型)。根据相关技术要求(美国FDA关于开发立体异构体新药的政策简介，中国新药杂志，2010年第9卷第9期)，须严格控制药物的所有光学异构体，以确保终产品的安全性、有效性和质量可控性。1-6化学结构式如下。

郭凤等提供了一种测定盐酸达卡他韦中5种光学异构体的HPLC法(盐酸达卡他韦中5 种光学异构体的HPLC法测定，中国医药工业杂志，2016年第47卷第10期)，其采用Chiralpak IC手性色谱柱，以甲基叔丁醚(含0.1％二乙胺)：甲醇(88：12)为流动相，盐酸达卡他韦及其5个光学异构体均分离完全。

关于手性化合物的分离，彭红等主编的《药物分析》于320页详细介绍了本领域常用的手性高效液相色谱法。320页记载，“引入适宜的手性环境使对映体间呈现理化特征差异，是HPLC法进行光学异构体拆分的关键。目前，手性HPLC法通常分为直接法和间接法。间接法又称柱前衍生化法，是指药物对映体在分离前先与具有高光学纯度的手性衍生化试剂反应，使药物对映体形成一对非对映异构体，再以常规固定相进行分离，也称CDR法。用手性流动相(CMP)或手性固定相(CSP)为载体进行拆分的方法是直接法。”CDR法、CMP 法和CSP法各有优缺点，《药物分析》322页进行了归纳，如下表所示。

可见，郭凤等提供的方法需要借助于昂贵的手性柱，成本高，且适用性不如普通HPLC 法。因此，开发一种手性流动相HPLC法分离盐酸达卡他韦及其五种光学异构体极具意义。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种高效液相色谱手性流动相法分离盐酸达卡他韦及其五种光学异构体。

本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：

方法A：

一种分离盐酸达卡他韦及其五种光学异构体的高效液相色谱手性流动相法，流动相添加剂为L-天门冬氨酸。

进一步地，固定相为十八烷基硅烷键合硅胶填料。

进一步地，流动相添加剂在流动相中的浓度为8-12mM。