[发明专利]一种包含涅氏短状杆菌的生物活性填料的制备方法

权利要求书

1.一种包含涅氏短状杆菌的微生物活性填料的制备方法，其特征在于，所述微生物活性填料是由涅氏短状杆菌NY-1菌悬液吸附于填料上，并将填料装填在网面空心球中制备而成；

所述涅氏短状杆菌具体为涅氏短状杆菌(Brachybacterium nesterenkovii)NY-1,保藏编号为CGMCC No.13747,

所述填料的具体制备步骤如下：

(1)涅氏短状杆菌NY-1菌悬液的制备

①将涅氏短状杆菌NY-1经斜面培养后接入液体发酵培养基，按10-25％接种量进行逐级扩大发酵培养；

②发酵培养结束后，将发酵液置于冷冻离心机中于4℃，2000-8000rpm，离心10-20min，弃去上清液，沉淀用无菌营养液稀释，获得菌体浓度为0.5-1.5g/L涅氏短状杆菌NY-1菌悬液；

(2)微生物活性填料的制备：

①将方块体或颗粒形状的填料填充到网面空心球中，网面空心球同填料质量比为100：100-450；

②将步骤(1)制备的涅氏短状杆菌NY-1菌悬液通过网面空心球的孔喷淋到方块体或颗粒形状的填料的表面；

③将负载有填料的网面空心球放入旋转混合器中旋转混合；

④再次向装有填料的网面空心球表面喷淋涅氏短状杆菌NY-1菌悬液；

重复步骤①-④2-3次，使空心球表面以及孔中填料上均附载有菌细胞，获得涅氏短状杆菌NY-1菌体浓度达到2.5×10⁷CFU/g-1.0×10¹⁰CFU/g_(填料)的微生物活性填料，4℃保存备用。

2.如权利要求1所述的一种包含涅氏短状杆菌的微生物活性填料的制备方法，其特征在于，发酵培养条件为：于36℃，通风量10-100L/min，溶解氧2.0mg/L,罐压0.03-0.10Mpa条件下，培养时间48h；

所述液体发酵培养基的组成为：葡萄糖0.5g，KH₂PO₄ 2.0g，NaHCO₃ 2.0g，KNO₃ 2.0g，NH₄Cl 0.5g，MgCl₂·6H₂O 0.5g，FeSO₄·7H₂O 0.01g，水1000mL，pH值6.8-7.2，121℃灭菌20min，灭菌后冷却至室温再加入2.0mg/L三氯乙醛。

3.如权利要求1所述的一种包含涅氏短状杆菌的微生物活性填料的制备方法，其特征在于，所述无菌营养液的组成为：葡萄糖0.5g，KH₂PO₄ 2.0g，NaHCO₃ 2.0g，KNO₃ 2.0g，NH₄Cl0.5g，MgCl₂·6H₂O 0.5g，FeCl₂·7H₂O 0.01g，水1000ml，pH值6.8-7.2，121℃灭菌20min。

4.如权利要求1所述的一种包含涅氏短状杆菌的微生物活性填料的制备方法，其特征在于，所述填料为聚氨酯泡沫块、陶粒、火山岩或分子筛中的一种或多种；

所述填料密度为20-900kg/m³,孔隙率为55-90％，粒径为4-85mm。

5.如权利要求1所述的一种包含涅氏短状杆菌的微生物活性填料的制备方法，其特征在于，所述的微生物菌悬液与轻质多孔填料的质量比为2-90∶10。

6.如权利要求1所述的一种包含涅氏短状杆菌的微生物活性填料的制备方法，其特征在于，所述的网面空心球材质为聚乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯。

7.如权利要求1所述的一种包含涅氏短状杆菌的微生物活性填料的制备方法，其特征在于，所述的网面空心球直径6cm，由两个半球组成，每个半球表面多孔，每个孔的孔径2-8mm；

所述的网面空心球中部有一圈加固环，加固环上设有锁扣，便于开启和闭合两个半球。