[发明专利]一种包含蒙氏假单胞菌的生物活性填料的制备方法

权利要求书

1.一种包含蒙氏假单胞菌的微生物活性填料的制备方法，其特征在于，所述蒙氏假单胞菌具体为蒙氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)LW-1，保藏编号为CGMCC No.13748，所述填料的具体制备步骤如下：

(1)蒙氏假单胞菌LW-1菌悬液的制备

①将蒙氏假单胞菌LW-1斜面活化后接入液体发酵培养基，按10-25％接种量进行逐级扩大发酵培养；

②发酵培养结束后，将发酵液置于冷冻离心机中于4℃，2000-8000rpm，离心10-20min，弃去上清液，沉淀用无菌营养液稀释，获得菌体浓度为0.30-0.95g/L蒙氏假单胞菌LW-1菌悬液；

(2)微生物活性填料的制备：

①将方块体或颗粒形状的填料填充到网面空心球中，填料与网面空心球的质量比为0.9-3：1；

②将步骤(1)制备的蒙氏假单胞菌LW-1菌悬液通过网面空心球的孔喷淋到方块体或颗粒形状的填料的表面；

③将负载有填料的网面空心球放入旋转混合器中旋转混合；

④再次向装有填料的网面空心球表面喷淋蒙氏假单胞菌LW-1菌悬液；

重复步骤①-④2-3次，使空心球表面以及孔中填料上均附载有菌细胞，获得蒙氏假单胞菌LW-1菌体浓度达到1.0×10⁵-9.0×10⁸CFU/g_(填料)的微生物活性填料，4℃保存备用。

2.如权利要求1所述的一种包含蒙氏假单胞菌的微生物活性填料的制备方法，其特征在于，发酵培养条件为：35-45℃，通风量10-100L/min，溶解氧>2.0mg/L,罐压0.03-0.10Mpa条件下，培养时间45-55h；

所述液体发酵培养基的组成为：葡萄糖0.5g，K₂HPO₄ 0.5g，KH₂PO₄ 1.5g，(NH₄)₂SO₄0.5g，NaCl 0.5g，MgSO₄ 0.2g，CaCl₂ 0.05g，FeSO₄ 0.02g，水1000mL，pH值6.2-7.0，115℃灭菌20min，灭菌后冷却至室温再加入4.5mg/L对硫磷和/或4.5mg/L三氯乙醛。

3.如权利要求1所述的一种包含蒙氏假单胞菌的微生物活性填料的制备方法，其特征在于，所述无菌营养液的组成为：葡萄糖0.5g，K₂HPO₄ 0.5g，KH₂PO₄ 1.5g，(NH₄)₂SO₄ 0.5g，NaCl 0.5g，MgCl₂ 0.2g，CaCl₂ 0.05g，FeSO₄ 0.02g，水1000mL，pH值6.8-7.2，121℃灭菌20min。

4.如权利要求1所述的一种包含蒙氏假单胞菌的微生物活性填料的制备方法，其特征在于，所述填料为聚氨酯泡沫块、陶粒、火山岩或分子筛中的一种或多种；

所述填料密度为20-80kg/m³,孔隙率为50-97％，粒径为10-100mm；

所述的微生物菌悬液与填料的质量比为1-12∶1。

5.如权利要求1所述的一种包含蒙氏假单胞菌的微生物活性填料的制备方法，其特征在于，所述的网面空心球材质为聚乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯。

6.如权利要求1所述的一种包含蒙氏假单胞菌的微生物活性填料的制备方法，其特征在于，所述的网面空心球直径6cm，由两个半球组成，每个半球表面多孔，每个孔的孔径2-8mm；

所述的网面空心球中部有一圈加固环，加固环上设有锁扣，便于开启和闭合两个半球。