[发明专利]用于欧鳇苗种鉴定的生物传感检测方法

说明书

本发明公开了一种用于欧鳇苗种鉴定的生物传感检测方法，以待测苗种的DNA为模板进行探针延伸获得探针延伸产物，应用生物传感检测方法检测所述探针延伸产物是否能够通过锚定标记分子锚定至修饰有锚定受体的电极表面并产生电化学信号，若是，则待测苗种为欧鳇苗种，其中，包括以下步骤：在探针延伸中，将带有锚定标记分子的dUTP连接至如SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列的探针上以获得所述待测苗种中欧鳇苗种的探针延伸产物。本发明方法能够在鲟鱼苗种引进时鉴定其物种来源，协助养殖机构开展养殖对象和加工产品分级。

技术领域

本发明涉及水产生物技术领域，特别涉及一种用于欧鳇苗种鉴定的生物传感检测方法。

背景技术

鲟鱼是鲟形目(Acipenseriformes)鱼类的统称，全世界现存2科6属27种，已全部列入《濒危野生动植物种国际贸易公约》(CITES)保护物种名录，当前合法销售的鲟鱼及其制品主要依赖人工养殖。在这一背景下，我国鲟鱼养殖产业蓬勃发展，年产量从2003年的0.94万吨增长至2016年的8.98万吨，稳居世界第一鲟鱼养殖大国，占世界总产量的80％以上。2017年起，鲟鱼被列入国家现代农业产业技术体系(特色淡水鱼体系)中。

鲟鱼是水产养殖物种中典型的高附加值品类，其鱼卵加工而成的鱼子酱是国际公认的高端食材，具有深厚的历史积淀和文化传承。鱼子酱饮食文化中对鱼卵的种质来源有着严格的限定，不同物种的鱼子酱价格差异巨大，使用欧鳇鱼卵加工而成的Beluga鱼子酱为其中的极品，价比黄金。但目前人工养殖的鲟鱼品类繁多，不仅包括鲟形目的多个物种，还涉及多个人工育成的杂交品种，外形相似度较高，很多养殖机构和人员并不清楚养殖对象的遗传背景。

目前进行鲟鱼物种鉴定主要采用的方法包括形态学和分子生物学方法。形态学方法不适用于受精卵和小规格苗种，无法在苗种引进阶段准确鉴定物种，而以物种特异性DNA序列为检测靶标的方法则不受发育时期、样本形态、组织来源的影响，并能够形成易于标准化的检测体系，在物种鉴定技术中逐渐占据了主流地位。

Congiu等使用AFLP分子标记方法进行了鲟鱼及鱼子酱产品的鉴别应用，Chelomina等使用RAPD分子标记进行施氏鲟(Acipenser schrenckii)自然种群中杂交种鉴别分析，董传举等开发了基于线粒体DNA的PCR-RFLP分子鉴定方法，但现有方法均需要通过电泳操作来检测产物，操作不当时对检测人员存在健康风险，未经安全处理的实验废弃物也可能造成环境污染隐患，因此只适用于专业实验室，不适用于现场检测。

因此，亟待开发准确便捷的现场检测技术，用于苗种引进时鉴定其物种来源，协助养殖机构开展养殖对象和加工产品分级。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种用于欧鳇苗种鉴定的生物传感检测方法，其能够通过对鲟鱼的待测苗种进行检测，以在欧鳇引进时鉴定其物种来源，协助养殖机构开展养殖对象和加工产品分级。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种用于欧鳇苗种鉴定的生物传感检测方法，以待测苗种的DNA为模板进行探针延伸获得探针延伸产物，应用生物传感检测方法检测所述探针延伸产物是否能够通过锚定标记分子锚定至修饰有锚定受体的电极表面并产生电化学信号，若是，则待测苗种为欧鳇苗种，其中，包括以下步骤：

在探针延伸中，将带有锚定标记分子的dUTP连接至如SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列的探针上以获得所述待测苗种中欧鳇苗种的探针延伸产物。

优选的是，还包括以下步骤：在探针延伸之前，向提取的待测苗种的DNA中依次加入带有锚定标记分子的dUTP、dATP、dTTP、DNA聚合酶、缓冲液和如SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列作为欧鳇特异性单链DNA探针构建探针延伸反应体系。