[发明专利]一种从杜仲中提取绿原酸的方法

说明书

本发明公开了一种从杜仲中提取绿原酸的方法，包括采用杜仲作为原料不需干燥直接使用，首先先采用杜仲和水通过三次提取制备绿原酸提取液，接着采用悬浮聚合法得到磁性分子印迹聚合物，最后使用所制备的磁性分子印迹聚合物吸附粗提液中的绿原酸，后经浓缩和减压干燥得到绿原酸，这种方式耗能少，绿原酸得率高，安全隐患低，从而简单高效地实现绿原酸的分离。

技术领域

本发明涉及一种提取方法，特别涉及一种从杜仲中提取绿原酸的方法。

背景技术

绿原酸(chlorogenic acid)是一种从双子叶植物(如忍冬叶、咖啡豆、向日葵等)的叶和果实分离得到的酚类,也是许多中草药(如杜仲、金银花、茵陈等)及中药复方制剂抗菌消炎、清热解毒的主要活性成分，目前已成为中草药制剂质量控制的主要指标之一。中草药是中华民族几千年文明的瑰宝，是我们炎黄子孙的骄傲。千百年来，我们的祖先运用中草药及其复方制剂在防病治病方面取得了异常丰富的临床经验，留下了一大批医药名著。近些年，由于西药的泛滥，病原微生物的变异及抗药性也取得了长足的“进步”，于是，人们重新将目光投向了中草药。特别是在人们日益崇尚天然、无污染食品的“后抗生素”时代，中草药以其独到的优势逐渐受到人们前所未有的青睐，中草药中有效成分的提取方法、作用机理、应用研究也重新成为医药界追逐的热点，并逐渐成为动物营养界研究的一大方向。

绿原酸是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物。它是一种由咖啡酸(caffeic acid)与奎尼酸(鸡纳酸,quinic acid,即1-羟基六氢没食子酸)缩合而成的缩酚酸,异名咖啡鞣酸,化学名3-O-咖啡酰奎尼酸(3-O-caffeoylquinicacid),分子式为C16H18O9,分子量：345.30，半水合物为针状晶体，110℃时变为无水化合物，易溶于水、乙醇、丙酮，微溶于乙酸乙酯，常温下呈淡黄色固体。

植物中绿原酸的生物合成包括了一系列的酶促反应。在酶的催化下,葡萄糖转化成莽草酸(shikimic acid),后者再转化成苯丙氨酸,最后经合成酶作用得绿原酸。其可能的生物合成途径如下：绿原酸在植物中分布广泛,从高等双子叶植物到蕨类植物均有报道，但含量较高的植物不多，主要存在于忍冬科忍冬属(Lonicera)、菊科蒿属(Artemisia)植物中，其中包括杜仲、金银花、向日葵、咖啡、可可树。植物的不同品种、发育阶段、同一植株的不同部位、存放时间、生长环境等均能影响植物中绿原酸的含量。以杜仲为例：杜仲叶中绿原酸的含量高于皮中含量数倍之多；用不同干燥方法对绿原酸含量的影响研究中,用阴干、晒干、直接烘干所测绿原酸含量分别是2.21％、2.17％和2.24％；鲜叶中含绿原酸3.52％,放置1年后,叶色棕绿,绿原酸含量为2.47％。由于绿原酸是极性较强的有机酸，易溶于醇、水，难溶于氯仿、乙醚,因此绿原酸的提取方法较多，有醇(甲醇、乙醇)溶法、水提醇沉、醇提铅沉、石灰乳沉淀法及聚酰胺柱层析法等。下面介绍几种已在被工业化批量生产使用的提取方法。

醇溶法：先用氯仿进行连续提取至流出液呈无色,再改用95％工业乙醇提取,提尽绿原酸；将所得乙醇提取液减压浓缩成浸膏,与干净的细沙拌合后,用热水提取数次,使绿原酸转溶于水中,弃去残渣；所得水溶液用乙醚萃取,进一步除去脂溶性杂质；向脱脂后的水溶液中加入饱和无机盐溶液,至沉淀完全,并稍有过量为止。此时,水中的绿原酸与金属离子结合生成不溶性盐；用离心分离法分离出沉淀并除去沉淀中的金属离子后,将所得滤液用有机溶剂萃取数次,回收溶剂,得绿原酸粗品,经分步结晶和重结晶等方法精制,即得绿原酸纯品,收得率约为0.5％。这种方法的弊端：工业用酒精(甚至用甲醇代替)都不是安全的提取溶媒；溶剂残留会影响产品质量，很难达到行业标准；会有大量的脂溶性杂质，影响产品纯度。

水提醇沉法：采用水为溶剂,加热煮沸提取,但相应地增加其他水溶性成分如蛋白质、多糖、鞣质等杂质,可用传统的醇沉法除去。醇沉过程中伴随吸附和包夹，致使绿原酸有不同程度的损失。提取水提液中绿原酸时,分次醇沉比一次醇沉所得产品纯度高；当乙醇浓度最终为90％时，一次醇沉的损失率比分次醇沉较大。