[发明专利]重组枯草芽孢杆菌及其过表达6-磷酸氨基葡萄糖合成酶促进乙酰氨基葡萄糖合成的方法

权利要求书

1.重组枯草芽孢杆菌，其特征在于：在重组枯草芽孢杆菌BSGNK的基础上，进一步过表达6-磷酸氨基葡萄糖合成酶（GlmS），得到重组菌BSGNKS；所述重组枯草芽孢杆菌BSGNK，是以B. subtilis 168 Δ nagP Δ gamP Δ gamA Δ nagA Δ nagB Δ ldh Δ pta Δglck :: lox72为宿主，分别以启动子PxylA、P43控制glms、GNA1的重组表达。

2.如权利要求1所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于：所述6-磷酸氨基葡萄糖合成酶（GlmS）编码基因glmS如NCBI中geneID:938736所示。

3.如权利要求1所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于：所述6-磷酸氨基葡萄糖合成酶（GlmS）的构建整合表达框为SEQID NO.1，并经同源重组整合至glcK位点。

4.利用如权利要求1、2或3所述的重组枯草芽孢杆菌过表达6-磷酸氨基葡萄糖合成酶促进乙酰氨基葡萄糖合成的方法，其特征在于：以重组枯草芽孢杆菌BSGNK作为出发菌株，过表达6-磷酸氨基葡萄糖合成酶（GlmS），所得的重组菌BSGNKS用于生产乙酰氨基葡萄糖，所述重组枯草芽孢杆菌BSGNK是以B. subtilis 168 Δ nagP Δ gamP Δ gamA Δ nagAΔ nagB Δ ldh Δ pta Δ glck :: lox72为宿主，分别以启动子P_xylA、P₄₃控制glms、GNA1的重组表达。

5.如权利要求4所述的重组枯草芽孢杆菌过表达6-磷酸氨基葡萄糖合成酶促进乙酰氨基葡萄糖合成的方法，其特征在于：利用所述重组菌BSGNKS结合复合培养基复合生产乙酰氨基葡萄糖。

6.如权利要求5所述的重组枯草芽孢杆菌过表达6-磷酸氨基葡萄糖合成酶促进乙酰氨基葡萄糖合成的方法，其特征在于：所述复合培养基包括按g/L计的以下组分：

初始葡萄糖55～65、蛋白胨 5～8、酵母粉 10～14、(NH₄)SO₄5～8、 K₂HPO₄·3H₂O 11～13、KH₂PO₄ 2～3.5、CaCO₃ 3.5～6、微量元素溶液 8～12ml/L；

所述微量元素溶液包括按g/L计的以下组分：

MnSO₄·5H₂O 0.75～1.25、Cocl ₂·6H₂O 0.3～0.5、NaMoO₄·2H₂O 0.1～0.3、ZnSO₄·7H₂O 0.1～0.3、 Alcl₃·6H₂O 0.05～0.15、Cucl 2·H₂O 0.05～0.15、H₃BO₄ 0.04～0.06。

7.如权利要求4所述的重组枯草芽孢杆菌过表达6-磷酸氨基葡萄糖合成酶促进乙酰氨基葡萄糖合成的方法，其特征在于：利用所述重组菌BSGNKS结合发酵培养基发酵法生产乙酰氨基葡萄糖。

8.如权利要求7所述的重组枯草芽孢杆菌过表达6-磷酸氨基葡萄糖合成酶促进乙酰氨基葡萄糖合成的方法，其特征在于：将活化后的所述重组枯草芽孢杆菌的种子培养液以至少10%的接种量转入所述发酵培养基中进行接种，接种至少2 h后加入诱导剂并置于摇瓶内，在30～40 ^oC的温度环境中以200～240rpm 的转速条件下培养至少 48 h。