[发明专利]改善胰岛素抵抗的二肽EL及其用途

说明书

本发明公开了一种改善胰岛素抵抗的二肽EL，该二肽EL的氨基酸序列为：Glu‑Leu。本发明还同时公开了上述二肽EL在制备降血糖功能药物中的应用；其能制备具有改善胰岛素抵抗功能的降血糖药物，即，制备可显著促进胰岛素抵抗的HepG2细胞对葡萄糖消耗以及糖原合成、改善胰岛素抵抗、达到降血糖效果的药物。

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及具有降血糖功能的二肽EL及其用途。

背景技术

糖尿病是一种严重危害人类健康的常见病和多发病。根据国际糖尿病联盟(IDF)最新报告显示，2017年全球糖尿病患者达4.25亿，预计到2045年，糖尿病患者将达6.29亿。我国是糖尿病患者人数最多的国家，患者数量达1.343亿，患病率为10.9％。其中，2型糖尿病占糖尿病的90％-95％，目前其治疗仍以药物治疗为主，主要有阿卡波糖、伏格列波糖、瑞格列奈、那格列奈、格列美脲、二甲双胍、噻唑烷二酮类等,这些药物虽能较好地控制血糖，但长期服用易产生耐药性，伴随许多不良反应和副作用，且无法有效改善胰岛素抵抗。因此，探寻一种降血糖活性好，安全性高，并且能有效改善胰岛素抵抗的的天然产物具有重要的意义。

胰岛素抵抗是2型糖尿病的主要发病机制之一，改善胰岛素抵抗是发展新型药物治疗2型糖尿病的重要战略。目前已有大量研究报道从动植物中发现具有降血糖作用的天然产物，如多糖类物质、酚类化合物等植物提取物、动植物蛋白水解物等。生物活性肽是源于蛋白质的多功能化合物，在生命活动中起着重要的调节作用，它比原料蛋白具有更优异的理化特性、营养特性和生物学活性，食用安全性极高。已有研究报道从天然产物中发现具有降血糖作用的多肽类物质，如从大马哈鱼、苦瓜、灵芝、玉米、癞葡萄及蜂蛹蛋白水解物中均发现具有降血糖活性的多肽。现有报道的降血糖多肽大多为蛋白水解混合物，较少涉及具体单一多肽从改善胰岛素抵抗途径达到降血糖的效果。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种改善胰岛素抵抗的二肽EL及其用途。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种改善胰岛素抵抗的二肽EL，该二肽EL的氨基酸序列为：Glu-Leu。

本发明还同时提供了上述二肽EL在制备降血糖药物中的应用。

作为本发明的二肽EL的应用的改进：制备具有改善胰岛素抵抗功能的降血糖药物。即，制备可显著促进胰岛素抵抗的HepG2细胞对葡萄糖消耗以及糖原合成，改善胰岛素抵抗，达到降血糖效果的药物。

本发明的二肽EL可通过委托吉尔生化(上海)有限公司合成获得。

本发明所设计的二肽是针对促进胰岛素抵抗的HepG2细胞对葡萄糖的消耗，以及促进细胞内糖原的合成，从而表现出具有降血糖功能的特性。

本发明中所涉及的各项试验方法具体如下：

1、HepG2细胞的培养

HepG2细胞复苏后用含10％灭活胎牛血清的DMEM高糖(葡萄糖浓度为4500mg/L)培养液转入细胞培养瓶中，37℃、5％CO₂条件下培养。当细胞贴壁长满后，弃去培养液，用PBS溶液轻轻洗涤2次，用0.25％胰蛋白酶消化，每3天按1：3比例传代1次，取对数生长期的细胞用于实验。

2、胰岛素抵抗HepG2细胞模型的建立

将处于对数生长期的HepG2细胞消化后，用含10％胎牛血清的DMEM高糖培养液调整为细胞密度为5×10⁴个/mL，接种于96孔培养板中，每孔100μL细胞悬液。待细胞单层贴壁后，更换含有胰岛素浓度为5×10^-7mol/L的DMEM高糖培养液，于37℃、5％CO₂条件下培养箱中孵育24h，建立胰岛素抵抗HepG2细胞模型。

3、葡萄糖消耗实验