[发明专利]一种制备槲皮素-3-D-木糖苷及槲皮素-3-D-阿拉伯糖苷的方法

说明书

本发明涉及一种用循环联合正反相高速逆流色谱法从农产品废弃物苹果叶75%乙醇‑水提取物中分离制备出高纯度单体槲皮素‑3‑D‑木糖苷和槲皮素‑3‑D‑阿拉伯糖苷的方法；它是采用循环联合正反相高速逆流色谱法从苹果叶75%乙醇‑水提取物中分离制备高纯度槲皮素‑3‑D‑木糖苷和槲皮素‑3‑D‑阿拉伯糖苷，其溶剂组分由三个组分构成：由乙酸乙酯、甲醇或乙腈或乙醇或正丁醇和水组成；体积比为：10‑25：1‑4：10‑25；其适用于采用各种型号的高速逆流色谱仪分离制备槲皮素‑3‑D‑木糖苷和槲皮素‑3‑D‑阿拉伯糖苷，能直接进大量粗品，槲皮素‑3‑D‑木糖苷和槲皮素‑3‑D‑阿拉伯糖苷分离纯度能达到96%以上。该方法操作简单，成本较低，分离效果好，为农产品中有效成分的分离纯化及高附加值利用提供了新的思路。

技术领域

本发明涉及一种采用循环联合正反相高速逆流色谱法从农产品废弃物苹果叶75%乙醇-水提取物中分离制备高纯度单体槲皮素-3-D-木糖苷和槲皮素-3-D-阿拉伯糖苷的方法。

背景技术

苹果蔷薇科（Rosaceae）苹果属（Malus）植物，是目前我国的第一大水果品种，生于海拔50-2500米的平原旷野、黄土丘陵及山坡等处，原产于欧洲和亚洲的中部，在我国甘肃、陕西、山东、河北、辽宁、四川、江苏、云南、西藏等地广泛种植栽培，栽培面积近200万平方千米，栽培面积和产量均占到世界的40%，位居我国首位，是我国少有的占据国际市场竞争优势的农产品。苹果叶是蔷薇科植物苹果的叶，苹果叶性味苦寒，凉血解毒，主治产后血晕，月经不调，发热、热毒疮瓣，烫伤等。每年随着苹果的收获都会产生大量的苹果落叶，仅陕西省每年就产生约200多万吨的苹果树叶，苹果叶被有效利用的几率很低，少量会被当作药材、饲料、肥料、燃料，其他大部分都直接被当作垃圾处理，造成资源的巨大损失和浪费，同时还会腐烂、变酸、变臭，对环境造成严重的污染。研究发现，这些废弃的苹果叶中含有大量的多酚类活性成分，如根皮苷、槲皮苷、异槲皮苷、槲皮素-3-D-木糖苷、槲皮素-3-D-阿拉伯糖苷等，而且显现出抗氧化、抗菌消炎、抗病毒、抗过敏、护肝、保护心血管、抗癌、抗糖尿病和神经保护效应等生物活性，在新型药物和天然保健食品开发中具有广泛的应用前景。因此，从苹果叶中提取、分离、纯化多酚活性成分，探究其生物活性，开发其实际应用，不但可以变废为宝、提高苹果的利用效率、实现对农业食品的高值化开发利用，同时还可以减少对环境造成的污染，具有重大的经济价值和社会效益。本文主要提取苹果叶中的槲皮素-3-D-木糖苷和槲皮素-3-D-阿拉伯糖苷，他们属于多酚中的黄酮苷类化合物，具有很强的抗氧化活性。

现有文献报道分离纯化槲皮素-3-D-木糖苷和槲皮素-3-D-阿拉伯糖苷的方法主要有大孔树脂法、制备液相色谱法和高速逆流色谱法等，其中大孔树脂法分离时间长，操作步骤繁琐，消耗大量的有机溶剂，很难获得极高纯度的单体，制备液相色谱法存在仪器设备昂贵，一次样品制备量少等问题，难以用于大量样品的分离纯化，而高速逆流色谱分离制备方法则可以简单快速廉价的获得高纯度单体。高速逆流色谱是近些年发展起来的一种连续的无需任何固体支持物的高效、快速的液液分配色谱分离技术，它避免了固态支持体或载体带来的各种问题---样品易被吸附、损耗和变性，保证较高峰型分辨度，分离量大、样品无损失、回收率高、分离环境缓和，节约溶剂。高速逆流色谱仪能直接进大量天然产物样品或合成混合物，分离结果能达到相当高的纯度，甚至能直接接质谱仪等仪器，已广泛应用于生物、医药、环保等领域化学物质的制备分离和纯化。

本发明建立了循环联合正反相高速逆流色谱法分离纯化苹果叶75%乙醇-水提取物中槲皮素-3-D-木糖苷和槲皮素-3-D-阿拉伯糖苷的方法。该方法操作简单，简便易行，且过程温和，分离效率高，对槲皮素-3-D-木糖苷和槲皮素-3-D-阿拉伯糖苷的分离纯化具有实际意义，也为农产品的高附加值利用提供了参考思路。

发明内容

本发明的目的是以75%乙醇-水提取的苹果叶粗品为原料，通过循环联合正反相高速逆流色谱的方法分离纯化得到槲皮素-3-D-木糖苷和槲皮素-3-D-阿拉伯糖苷单体，纯度在96%以上。