[发明专利]一种稻米中镉结合蛋白的提取分离方法

权利要求书

1.一种稻米中镉结合蛋白的提取分离方法，其特征在于，包括以下步骤：

将镉污染稻米粉碎成稻米粉，然后将稻米粉加入到正己烷中，进行第一次搅拌提取后离心、干燥，得到脱脂稻米粉；

使用去离子水对脱脂稻米粉进行第二次搅拌提取后离心，获得第一上清液和第一沉淀物，将第一上清液的pH值调节至清蛋白对应的等电点，使清蛋白沉降，然后再次离心并收集清蛋白沉淀，获得清蛋白提取物；

使用NaCl溶液对第一沉淀物进行第三次搅拌提取后离心，获得第二上清液和第二沉淀物，将第二上清液的pH值调节至球蛋白对应的等电点，使球蛋白沉降，然后再次离心并收集球蛋白沉淀，获得球蛋白提取物；

使用NaOH溶液对第二沉淀物进行第四次搅拌提取后离心，获得第三上清液和第三沉淀物，将第三上清液的pH值调节至谷蛋白对应的等电点，使谷蛋白沉降，然后再次离心并收集谷蛋白沉淀，获得谷蛋白提取物；

使用乙醇溶液对第三沉淀物进行第五次搅拌提取后离心，收集滤液，将滤液的pH值调节至醇溶蛋白对应的等电点，使醇溶蛋白沉降，然后再次离心并收集醇溶蛋白沉淀，获得醇溶蛋白提取物。

2.如权利要求1所述的稻米中镉结合蛋白的提取分离方法，其特征在于，所述镉污染稻米中的镉含量为0.5～1.0mg/kg。

3.如权利要求1所述的稻米中镉结合蛋白的提取分离方法，其特征在于，所述NaCl溶液的质量浓度为4～6％；

所述NaOH溶液的摩尔浓度为0.01～0.03M，所述NaOH溶液的pH值为11；

所述乙醇溶液的体积分数为65～75％。

4.如权利要求1所述的稻米中镉结合蛋白的提取分离方法，其特征在于，所述第一次搅拌提取至第五次搅拌提取的固液比均为1g：3～5mL，提取温度为20～28℃；

所述第一次搅拌提取至第三次搅拌提取、以及第五次搅拌提取的提取时间为3～5h，所述第四次搅拌提取的提取时间为0.3～0.7h。

5.如权利要求1所述的稻米中镉结合蛋白的提取分离方法，其特征在于，将第一上清液、第二上清液、第三上清液及滤液的pH值对应调节至清蛋白、球蛋白、谷蛋白、醇溶蛋白对应的等电点的步骤，均采用HCl溶液调节溶液的pH值。

6.如权利要求5所述的稻米中镉结合蛋白的提取分离方法，其特征在于，所述清蛋白、球蛋白、谷蛋白和醇溶蛋白对应的等电点pI分别为4.13、2.32、6.32和4.98。

7.如权利要求1所述的稻米中镉结合蛋白的提取分离方法，其特征在于，所有所述离心的条件均为：离心转速2500～3500rpm，离心时间25～35min。

8.如权利要求1所述的稻米中镉结合蛋白的提取分离方法，其特征在于，对应收集清蛋白沉淀、球蛋白沉淀、谷蛋白沉淀和醇溶蛋白沉淀的步骤之后，对应获得清蛋白提取物、球蛋白提取物、谷蛋白提取物和醇溶蛋白提取物的步骤之前，还包括：

蛋白沉淀经水洗后，使用HCl溶液调节蛋白沉淀的pH值至7.0，然后将蛋白沉淀置于-22～18℃冻存，冻存后的蛋白沉淀再于-50～-40℃、20～30Pa条件下进行真空冷冻干燥3.5～4.5d。