[发明专利]同步检测基因突变和甲基化的方法及其应用

权利要求书

1.一种同步检测待测样本中基因突变和甲基化修饰的方法，其特征在于，所述方法为非诊断性方法，所述方法包括：

(1)对待测样本进行重亚硫酸盐处理，使未发生甲基化修饰的胞嘧啶转化为尿嘧啶；

(2)设置反应体系a，以步骤(1)处理后样本为模板，加入特异性检测基因突变的引物和探针、甲基化修饰检测区段的通用引物和探针；

设置反应体系b，以步骤(1)处理后样本为模板，加入特异性检测甲基化修饰的引物和探针、基因突变区段的通用引物和探针；

(3)反应体系a和反应体系b分别进行PCR反应，确定相关的基因突变和甲基化修饰的存在与否或存在量。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的基因突变包括：位于核酸上的碱基替换、缺失或插入；或

所述的甲基化修饰包括：CpG位点甲基化修饰。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的特异性检测基因突变的引物和探针，仅扩增和检测发生基因突变的核酸区段；

所述的特异性检测甲基化修饰的引物和探针，仅扩增和检测发生甲基化修饰的核酸区段；

所述的基因突变区段的通用引物和探针，同时扩增和检测突变型和野生型核酸区段；

所述的甲基化修饰检测区段的通用引物和探针，同时扩增和检测发生甲基化修饰和未发生甲基化修饰的核酸区段。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的特异性检测基因突变的探针与所述的基因突变区段的通用探针为同一探针，所述的特异性检测基因突变的引物中，包括一条针对基因突变位点的引物及一条非针对突变位点的引物。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，突变检测通用引物的其一与该针对基因突变位点的引物序列相近，但不包含突变位点，突变检测通用引物的另一与该非针对突变位点的引物相同。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的特异性检测甲基化修饰的引物与甲基化修饰检测区段的通用引物相同，但特异性检测甲基化修饰的探针与甲基化修饰检测区段的通用探针不同。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的特异性检测基因突变的引物与所述的基因突变区段的通用引物相同，所述的特异性检测基因突变的探针与所述的基因突变区段的通用探针不同。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的特异性检测甲基化修饰的探针与甲基化修饰检测区段的通用探针为同一探针，所述的特异性检测甲基化修饰的引物中，包括一条针对甲基化修饰的引物及一条非针对甲基化修饰的引物。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，甲基化修饰检测区段的通用引物的其一与该针对甲基化修饰的引物序列相近，但不包含CpG位点，甲基化修饰检测区段通用引物的另一与该非针甲基化修饰的引物相同。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，反应体系a中，所述的特异性检测基因突变的探针与所述的甲基化修饰检测区段的通用探针，携带不同的报告信号；反应体系b中，所述的特异性检测甲基化修饰的探针与所述的基因突变区段的通用探针，携带不同的报告信号。

11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述的特异性检测基因突变的探针与所述的基因突变区段的通用探针，携带相同的报告信号；所述的特异性检测甲基化修饰的探针与所述的甲基化检测区段的通用探针，携带相同的报告信号；从而对所述基因突变和所述甲基化修饰进行同步检测。

12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述的报告信号为荧光基团。

13.如权利要求1～12任一所述的方法，其特征在于，同步检测待测样本中1～5种基因突变，和/或1～5种甲基化修饰。