[发明专利]用于组氨酸标签蛋白纯化的纳米二氧化硅颗粒及其制备方法

权利要求书

1.用于组氨酸标签蛋白纯化的纳米二氧化硅颗粒的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

步骤1，将纳米二氧化硅颗粒超声分散在乙醇中，加入3-氨基丙基三乙氧基硅烷，常温搅拌，离心，得到氨基化的纳米二氧化硅颗粒；

步骤2，将氨基化的纳米二氧化硅颗粒用磷酸盐缓冲液洗涤除去未反应的3-氨基丙基三乙氧基硅烷，超声分散在磷酸盐缓冲液中，加入戊二醛溶液，常温搅拌，反应结束后，磷酸盐缓冲液洗涤，离心，得到醛基化的纳米二氧化硅颗粒；

步骤3，醛基化的纳米二氧化硅颗粒用磷酸盐缓冲液重新悬浮，加入含亚氨基二乙酸的4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸溶液，常温搅拌，用Tris-HCl缓冲液洗涤和重新悬浮，加入氰基硼氢化钠溶液，常温搅拌，离心，Tris-HCl缓冲液洗涤，得到用于组氨酸标签蛋白纯化的纳米二氧化硅颗粒。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的纳米二氧化硅颗粒的粒径为10～500nm。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的含亚氨基二乙酸的4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸溶液中，亚氨基二乙酸的质量浓度为0.05％。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的氰基硼氢化钠的浓度为1～10mM。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的常温搅拌时间为0.5～12h。

6.根据权利要求1至5任一所述的制备方法制得的纳米二氧化硅颗粒。

7.根据权利要求6所述的纳米二氧化硅颗粒在组氨酸标签蛋白纯化中的应用，其特征在于，具体步骤如下：

用Tris-HCl缓冲液重新悬浮用于组氨酸标签蛋白纯化的纳米二氧化硅颗粒，加入硫酸镍溶液，常温搅拌，水洗，用磷酸盐缓冲液重新悬浮，将纳米二氧化硅颗粒悬浮液加入到含组氨酸标签蛋白的水溶液中，常温振荡混合，离心收集纳米二氧化硅颗粒，用含1～25mM咪唑的磷酸盐缓冲液洗涤，再用含0.4～1.5M咪唑的磷酸盐缓冲液洗脱组氨酸标签蛋白，离心去除纳米二氧化硅颗粒，上清液为得到的纯化的组氨酸标签蛋白溶液。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的常温搅拌的时间为1～30min。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的硫酸镍溶液浓度为0.1～1M。

10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的磷酸盐缓冲液pH为7.3。