[发明专利]刺五加多糖分离纯化方法

说明书

本发明公开了一种刺五加多糖分离纯化方法，包括如下步骤：首先将刺五加根茎经破碎、沸水煮提、乙醇醇沉和常规干燥后可以得到深灰色固体粉末，其为刺五加多糖；通过DEAE‑纤维素离子交换层析和Sepharose CL‑6B分子筛层析交替组合的方法可将刺五加多糖分级得到中性糖级分ASPN和四种酸性糖级分ASPA‑1、ASPA‑2、ASPA‑1A和ASPA‑1B；其次运用高效液相色谱、红外光谱和核磁共振波谱分析各级分的组成为Gal(24.2％)、Glc(17.1％)、Ara(15.4％)、Rha(13.6％)、Xyl(11.6％)和GalA(14.9％)。

技术领域

本发明涉及多糖分离技术领域，具体涉及一种刺五加多糖分离纯化方法。

背景技术

多糖是许多药用植物的活性成分，我们前期工作表明刺五加多糖具有良好的抑制肿瘤细胞生长的活性,但刺五加多糖中各级分对活性的贡献和构效关系尚不清楚。

根据文献报道和我们前期的研究结果表明，植物中药多糖是多种组分的混合物，多数包括中性淀粉样多糖和酸性果胶类多糖，果胶类多糖主要含有阿拉伯半乳聚糖(AG)、I型聚鼠李半乳糖醛酸(RG-I)和同聚半乳糖醛酸(HG)，本研究组通过水提醇沉得到刺五加总糖，然后系統分级刺五加多糖，分析各种级分的结构，研究其抗肿瘤活性，探讨刺五加多糖的构效关系。再进一步比较人参和刺五加结构相近的级分的抗肿瘤活性，探讨药用植物多糖的构效关系。

发明内容

(一)要解决的技术问题

为了克服现有技术不足，现提出一种刺五加多糖分离纯化方法，可以很好的分离的出多糖级分的结构。

(二)技术方案

本发明通过如下技术方案实现：本发明提出了一种刺五加多糖分离纯化方法，包括如下步骤：首先将刺五加根茎经破碎、沸水煮提、乙醇醇沉和常规干燥后可以得到深灰色固体粉末，其为刺五加多糖；通过DEAE-纤维素离子交换层析和Sepharose CL-6B分子筛层析交替组合的方法可将刺五加多糖分级得到中性糖级分ASPN和四种酸性糖级分ASPA-1、ASPA-2、ASPA-1A和ASPA-1B；其次运用高效液相色谱、红外光谱和核磁共振波谱分析各级分的组成为Gal(24.2％)、Glc(17.1％)、Ara(15.4％)、Rha(13.6％)、Xyl(11.6％)和GalA(14.9％)。

(三)有益效果

本发明相对于现有技术，具有以下有益效果：

本发明提到的一种刺五加多糖分离纯化方法，优化了刺五加多糖的提取及分离纯化，通过DEAE-纤维素离子交换层析和SepharoseCL-6B分子筛层析交替组合的方法可将刺五加多糖分级得到中性糖级分ASPN和四种酸性糖级分ASPA-1.ASPA-2.ASPA-1A和ASPA-IB，运用高效液相色谱(HPLC)、红外光谱(FT-IR)和核磁共振波谱(NMR)等方法分析了各级分的结构特征：ASPN为淀粉样葡聚糖；ASPA中有RG-I、AG和XGA结构。ASPA-1中主要含有RG-1和XGA结构域，AG作为支链连接在RG-I，而XGA中的GalAp有甲酯化和乙酰化取代。ASPA-2为RG-1结构的果胶，支链为AG-I结构；ASPA-1-A和ASPA-1-B均包含RG-I和XGA结构，但ASPA-1-B中的GalAp甲酯化和乙酰化程度较高。此外分析比较了不同结构的刺五加多糖的抗肿瘤作用，发现刺五加中RG-1结构域是其活性单元。又进一步比较了人参RG-I型果胶级分(RG-1-4)和刺五加RG-1型果胶级分(ASPA-2)的抗肿瘤活性，发现五加科药用植物中RG-1结构域是其发挥抗肿瘤药效的结构单元，而且RG-1主链上GalA的乙酰化程度可能影响抗肿瘤活性。研究结果为药用植物的应用提供理论依据。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。