[发明专利]一种NZW/LacJ狼疮鼠脾淋巴细胞激素耐药模型及其建立方法

说明书

本发明属于生物医药领域，尤其涉及一种细胞激素耐药模型及其建立方法。一种NZW/LacJ狼疮鼠脾淋巴细胞激素耐药模型，该淋巴细胞激素耐药模型由获取的NZW/LacJ狼疮鼠脾淋巴细胞进行0.5～4μg/ml注射用甲基强的松龙干预获得。本发明采用低剂量甲基强的松龙诱导人淋巴细胞产生获得性激素耐药，表现为P‑gp表达的上调和其转运底物罗丹明‑123在细胞内积累减少，成功构建激素耐药细胞模型。但以人为对象的研究，受到取材、伦理等多种因素的限制，给进一步深入研究激素耐药及逆转机制带来不便，若能在动物中也复制出相应的淋巴细胞激素耐药模型，将会给进一步深入研究带来极大的方便。

技术领域

本发明属于生物医药领域，尤其涉及一种NZW/LacJ狼疮鼠脾淋巴细胞激素耐药模型及其建立方法和应用。

背景技术

系统性红斑狼疮(SLE)是一种以多系统或器官病变和血清中出现多种自身抗体为特征的自身免疫性疾病，外周血淋巴细胞的异常活化是SLE乃至各种免疫性疾病的重要特征，也是糖皮质激素或免疫抑制剂作用的重要靶细胞。因此对外周血淋巴细胞活性及功能的干预是SLE体外研究的重要途径。

有研究认为，小鼠淋巴细胞与大鼠、人等种类的淋巴细胞不同，对体外生长刺激因子如刀豆蛋白A(ConA)、植物血凝素(PHA)等反应性非常低，因此小鼠淋巴细胞的培养过程中必需添加另外的营养和生长刺激因子成分，其中IL-2被认为是必须的。

P-gp是一种ATP依赖性的跨膜转运蛋白，是最早发现的一种与肿瘤多药耐药(muhidrug resistance，MDR)有关的蛋白质，它能将多种结构和药效不同的化合物排出细胞，导致肿瘤化疗失败。但P-gp不仅在肿瘤细胞中高表达，而且在很多正常组织中表达，如多功能干细胞、单核细胞、树突状细胞、淋巴细胞等。淋巴细胞作为机体最主要的免疫细胞，又是SLE等自身免疫疾病的主要治疗靶点，探讨其P-gp表达特点及其与激素耐药的关系，有着重要的理论和临床价值。

在构建细胞多药耐药模型方面，虽然肿瘤研究领域已经拥有了较为成熟的方法，并积累了丰富的经验，但这一方法并不完全适合于构建淋巴细胞的多药耐药模型。其原因是：肿瘤细胞株具有可传代的特点，构建肿瘤细胞多药耐药模型时，通过小剂量细胞毒药物的间断反复使用，即可通过不断筛选而构建耐药模型。而成熟淋巴细胞属于原代细胞，不能传代，若采用细胞毒药物，则细胞将会大量死亡而导致造模失败。

发明内容

为了解决上述的问题，本发明的一个目的是提供一种NZW/LacJ狼疮鼠脾淋巴细胞激素耐药模型，该模型采用小剂量甲强龙诱导，既避免了细胞死亡，又能成功诱导P-gp的高表达，本发明的另外一个目的是提供上述的耐药模型的建立方法。

为了实现上述的第一个目的，本发明采用了以下的技术方案：

一种NZW/LacJ狼疮鼠脾淋巴细胞激素耐药模型，该NZW/LacJ狼疮鼠脾淋巴细胞激素耐药模型由NZW/LacJ狼疮鼠脾淋巴细胞用注射用甲基强的松龙干预获得。

作为优选，所述注射用甲基强的松龙的浓度为0.1～4μg/mL。

作为优选，所述注射用甲基强的松龙的浓度为2～4μg/mL。

本发明的另一个目的是提供一种NZW/LacJ狼疮鼠脾淋巴细胞激素耐药模型的建立方法，其中，该方法包括如下步骤：

1)分离NZW/LacJ狼疮鼠脾淋巴细胞；

2)将NZW/LacJ狼疮鼠脾淋巴细胞进行注射用甲基强的松龙干预；

3)培养、分离。