[发明专利]一种具有抗皮肤癌作用的组合物及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种具有抗皮肤癌作用的组合物及其制备方法，所述组合物由甘草异黄酮B 1～2重量份，新甘草酚1～2重量份,甘草查耳酮A2～4份组成。其中甘草异黄酮B与新甘草酚可以分别通过P38MAPKs通路、PI3K/AKT通路促进皮肤癌细胞的分化，抑制皮肤癌细胞的增殖，而甘草查耳酮A可以通过PARP通路诱导皮肤癌细胞的凋亡，从而达到抑制皮肤癌细胞的生长。本发明通过大量实验筛选得到最佳用量比的3个单体异戊烯基黄酮化合物的组合物，该组合物可以通过多靶点协同，显著提升抑制皮肤癌细胞生长，具有良好的预防和治疗皮肤癌的作用，具有很好的开发应用前景。

技术领域

本发明属于中药及天然药物技术领域，具体涉及一种具有抗皮肤癌作用的组合物及制备方法与用途。

背景技术

皮肤癌是一种常见的恶性肿瘤，其发病率呈逐年上升趋势，目前仍无有效的治疗药物。皮肤癌主要分为鳞状细胞癌、恶性黑色素瘤、汗腺癌、血管肉瘤等，其中黑色素瘤是最危险的皮肤癌，它能随血液、淋巴扩散，若治疗时黑色素瘤已扩散，死亡风险极高，大部分皮肤癌致死的病例均由黑色素瘤引起。近期有研究表明，抑制皮肤癌细胞的增殖除了可以通过促进癌细胞凋亡、自噬等常见机制发挥作用外，还可以通过促进癌细胞向正常细胞分化而起到抑制其增殖，最终发挥预防或治疗作用。

甘草作为一种优良的天然植物资源及中药材，已被广泛应用于医药、食品、化妆品、畜牧等领域。目前甘草药材主要采用水提或碱水提取法生产甘草浸膏、甘草酸粗提物等，前期我们研究发现，甘草中除了中等极性的活性化合物以外，还存在着丰富的弱极性黄酮类活性物质，具有抗氧化活性(方诗琦,冷康，段金廒,李存玉，魏娟花，郑云枫，彭国平。甘草黄酮类成分及其体外抗氧化活性研究[J].中成药,2015,37(11):2443-2448.)。但是关于甘草黄酮类成分抗皮肤癌的活性较少。

发明内容

发明目的：为了更好地开发利用甘草资源，本发明对甘草中弱极性总黄酮的提取精制工艺进行优化，并在活性筛选研究过程中发现，甘草弱极性总黄酮部位具有良好的抑制黑色素癌细胞(B16-F10、A375、A2058)生长的作用。进一步的活性物质筛选研究发现，其中的3个具异戊二烯基的不同类型黄酮成分—甘草异黄酮B(异黄酮)，新甘草酚(香豆素)和甘草查耳酮A(查耳酮)为其主要活性物质，作用机制研究表明这3个主要活性成分可以分别通过不同的途径(促进癌细胞分化或淍亡)发挥作用。依据中药具多成分多靶点的研究思路，本发明以这3个主要活性成分按照不同重量比例进行大量筛选重量配伍实验，筛选出最佳的用量，且具有显著的协同抑制皮肤癌细胞功效的的组合物。

技术方案：为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种具有抗皮肤癌作用的组合物，该组合物包括甘草异黄酮B，新甘草酚和甘草查耳酮A；

作为优选方案，以上所述的一种具有抗皮肤癌作用的组合物，该组合物由甘草异黄酮B1重量份，新甘草酚1～3重量份和甘草查耳酮A1～3重量份组成。

作为优选方案，以上所述的一种具有抗皮肤癌作用的组合物，所述组合物由甘草异黄酮B1重量份，新甘草酚2重量份,甘草查耳酮A2重量份组成。

本发明所述的一种具有抗皮肤癌作用的组合物，所述甘草异黄酮B，新甘草酚,甘草查耳酮A的制备方法为：

(1)取甘草，采用乙醇提取，减压回收提取液，浓缩至相对密度为1.20～1.35稠膏；

(2)取稠膏，加入吸附剂，拌匀，干燥，粉碎，装入超临界萃取斧中，以萃取压力10～30MPa，萃取温度45～55℃，夹带剂为乙醇，夹带剂用量为5％～10％，分离压力4～10MPa，分离斧温度30～40℃，萃取时间为1～3小时，从分离斧中收集萃取液，回收乙醇，得超临界精制部位；

(3)所得超临界精制部位经ODS反相硅胶色谱柱吸附，以体积浓度60％～80％乙醇水溶液洗脱，分离获得甘草异黄酮B，新甘草酚和甘草查耳酮A。