[发明专利]木聚糖酶基因、重组表达质粒、重组表达菌株、木聚糖酶及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 201810470802.7 | 申请日： | 2018-05-16 |
| 公开（公告）号： | CN108410890A | 公开（公告）日： | 2018-08-17 |
| 发明（设计）人： | 韩正刚 | 申请（专利权）人： | 武汉轻工大学 |
| 主分类号： | C12N15/56 | 分类号： | C12N15/56;C12N9/24;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/14;C12R1/19 |
| 代理公司： | 深圳市世纪恒程知识产权代理事务所 44287 | 代理人： | 胡海国 |
| 地址： | 430023 湖北省武*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 木聚糖酶基因 重组表达菌株 木聚糖酶 木聚寡糖 制备方法和应用 重组表达质粒 编码木聚糖酶 大肠杆菌 氨基酸序列 高密度发酵 核苷酸序列 聚糖酶基因 木聚糖水解 亲和纯化 高活性 耐盐性 益生素 有效地 食品加工 残基 可用 制备 种木 转入 | ||
1.一种木聚糖酶基因laXynA，用于编码木聚糖酶，其特征在于，所述木聚糖酶基因laXynA的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2.一种木聚糖酶，由如权利要求1所述的木聚糖酶基因laXynA编码，其特征在于，所述木聚糖酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
3.一种重组表达质粒，其特征在于，包括如权利要求1所述的木聚糖酶基因laXynA。
4.一种重组表达菌株，其特征在于，包括如权利要求1所述的木聚糖酶基因laXynA。
5.一种如权利要求3所述的重组表达质粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将木聚糖酶基因laXynA通过酶切位点EcoR1和Not1连接到载体pET-28a上，连接产物转化到大肠杆菌DH5α中，用试剂盒提取质粒，获得重组表达质粒pET-28a-laXynA。
6.一种如权利要求4所述的重组表达菌株的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将木聚糖酶基因laXynA通过酶切位点EcoR1和Not1连接到载体pET-28a上，连接产物转化到大肠杆菌DH5α中，用试剂盒提取质粒，获得重组表达质粒pET-28a-laXynA；
将重组表达质粒pET-28a-laXynA采用CaCl2法转化大肠杆菌BL21(Rosetta)，得到含有质粒pET-28a-laXynA的重组大肠杆菌BL21(Rosetta)，即为重组表达菌株。
7.一种如权利要求2所述木聚糖酶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
将木聚糖酶基因laXynA通过酶切位点EcoR1和Not1连接到载体pET-28a上，连接产物转化到大肠杆菌DH5α中，用试剂盒提取质粒，获得重组表达质粒pET-28a-laXynA；
将重组表达质粒pET-28a-laXynA采用CaCl2法转化大肠杆菌BL21(Rosetta)，得到含有质粒pET-28a-laXynA的大肠杆菌BL21(Rosetta)；
将含有质粒pET-28a-laXynA的大肠杆菌BL21(Rosetta)按1:90～110的比例接种至ZYP-5052培养基中，于37℃、180～220rpm条件下培养至OD600为0.95～1.05，然后将温度降低至18～22℃，继续培养20～26h后，离心收集菌体，将菌体悬浮于HisTrap A缓冲液，然后通过压力破碎后离心取上清液；
在8～10℃的温度环境下，将上清液通过HisTrap亲和层析柱后，使用HisTrap B缓冲液在AKTA蛋白纯化仪上梯度洗脱层析柱上的重组蛋白，然后使用截留分子量为10kDa的Millipore浓缩管将重组蛋白换液至磷酸盐缓冲液中浓缩至蛋白浓度为1mg/mL，得到纯化的木聚糖酶。
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