[发明专利]一种温室苗期鉴定南瓜青枯病抗性品种的方法

说明书

本发明公开了一种温室苗期鉴定南瓜青枯病抗性品种的方法。该方法包括如下步骤：(1)培育接种用南瓜苗：先在温室大棚内培育2～3片真叶期的接种用南瓜苗；(2)接种：将接种用南瓜苗采用浸根接种法接种南瓜青枯病菌；(3)调查方法：接种后每周调查一次，记录接种南瓜青枯菌后的总株数和发病株数，并统计其病株率，并判断南瓜品种对南瓜青枯病的抗性。本发明方法操作简便，所需时间短，鉴定结果准确可靠且不受大田环境影响，可显著区分不同南瓜品种对青枯病的抗感差异，适合同时对大批量南瓜材料抗青枯病鉴定和筛选，有利于提高抗病材料的筛选效率。

技术领域

本发明属于植物保护领域，特别涉及一种温室苗期鉴定南瓜青枯病抗性品种的方法。

背景技术

南瓜青枯病是由变形菌门β-变形菌纲伯克氏菌目伯克氏菌科雷尔氏菌属的茄科雷尔氏菌侵染引起的一种土传维管束病害。南瓜青枯病是近年来南方新发现的病害，田间病株率约25～45％，造成了严重的经济损失。由于南瓜青枯菌可长期在土壤存活，防治南瓜青枯病比较困难。

目前针对南瓜青枯病的防治措施主要包括与非寄主、茄科类作物的轮作、调节土壤酸度、及时拔除病株等栽培措施，但是防治效果不理想；利用杀菌剂如77％氢氧化铜可湿性粉剂1000倍液，或20％噻菌铜悬浮剂1000倍液、72％农用链霉素可溶性粉剂4000倍液灌根对南瓜青枯病发生可起到预防作用，但是防治效果不佳。同时由于使用农药一方面容易导致病原菌产生抗药性、污染环境等问题，另一方面也会带来农产品食用安全问题。在国家目前提倡的“化肥农药减施”方针政策指导下，急需建立经济有效的防治措施。南瓜青枯病最经济有效的防治的措施就是选育和种植抗南瓜青枯病品种。我国目前尚无高抗南瓜青枯病的南瓜品种报道，而筛选抗病品种必须建立快速、稳定、可靠的鉴定抗性品种的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种温室苗期鉴定南瓜青枯病抗性品种的方法。旨建立一种快速、稳定、可靠的南瓜青枯病接种方法，便于苗期筛选抗青枯病的南瓜种质，获得抗青枯病的材料，为抗病育种提供技术手段。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种温室苗期鉴定南瓜青枯病抗性品种的方法，包括如下步骤：

(1)培育接种用南瓜苗：将南瓜种子播种到装有已灭菌泥炭土的育苗盘中，然后将育苗盘置于25～35℃的温室大棚内培育，待长至2～3片真叶时，获得接种用南瓜苗；

(2)接种：将2～3片真叶期的接种用南瓜苗从育苗盘中拔出，并用自来水冲去南瓜苗植株根部的泥土，然后将根部浸泡到南瓜青枯菌悬浮液中，再移植到装有灭菌土的育苗盘中，每穴一株南瓜苗；其中，每次处理的南瓜苗不少于30株，重复至少4次；

(3)调查方法：接种后每周调查一次，记录接种南瓜青枯菌后的总株数和发病株数，并统计其病株率＝(发病株数/总株数)×100％，并按以下标准进行抗性水平分类：

病株率≤20％为高抗(HR)；20％＜病株率≤40％为抗病(R)；40％＜病株率≤60％为耐病(MR)；60％＜病株率≤80％为感病(S)；病株率＞80为高感(HS)。

步骤(1)中所述的温室大棚内培育的时间优选为2～3周。

步骤(1)中所述的育苗盘优选为72孔育苗盘，其规格为：54cm×28cm，穴深4cm，穴口口径3.8cm，穴底直径2.2cm。

步骤(2)中所述的浸泡的时间优选为20分钟。

步骤(2)中所述的南瓜青枯菌悬浮液为浓度为10⁸～10⁹CFU/ml的南瓜青枯菌悬浮液；优选为通过如下步骤制备得到：将南瓜青枯病菌菌株置于30℃的TZC平板上培养48小时，然后挑取单菌落接种到TZC培养基试管斜面，30℃条件下培养24小时，再从TZC培养基试管斜面挑取菌落接种到NA液体培养基中，30℃下、150rpm/min培养24小时，得到南瓜青枯菌悬浮液。