[发明专利]一种固态发酵生产鼠李糖脂生物表面活性剂的方法

权利要求书

1.一种固态发酵生产鼠李糖脂生物表面活性剂的方法，其特征在于，是由以下步骤制得的：

1）一级种子培养：液体种子培养基在115℃灭菌10-30min，将铜绿假单胞菌菌种接种至液体种子培养基，摇床培养，得一级种子液；

2）二级培养：将8L液体种子培养基装至15L的机械搅拌式发酵罐中，115℃灭菌20min，冷却至30℃；将一级种子液接种至冷却好的液体种子培养基中，培养至种子液长到OD₆₀₀=12，停止培养，得二级种子液；

3）压力脉动固态发酵：将固态发酵培养基按照0.4-0.55的装料系数装至50L压力脉动固态发酵罐中，125℃灭菌30min，冷却至30℃；将二级种子液接种至固态发酵培养基，压力脉动固态发酵培养168h，得发酵物料；

4）将发酵物料装至滤袋中，挤压，得发酵液；草酸调节发酵液pH至5.0，截留量为5Kda超滤膜过滤，得浓缩液；草酸调节浓缩液pH至3.0，3500rpm离心取沉淀物，干燥，得鼠李糖脂生物表面活性剂；

所述步骤3）中，压力脉动固态发酵培养时，通气量为10-15L/min，相对湿度为85-98%，培养温度为30℃，转速为50-70rpm；

所述步骤3）中，压力脉动固态发酵培养时，压力脉动周期为15-30min，一个周期内谷压压力为0.05-0.1MPa，谷压维持时间为5-15min；峰压压力为0.15-0.25MPa，峰压维持时间为5-15min；

所述步骤3）中，固态发酵培养基是由液态培养基和惰性多孔材料聚氨酯泡沫按照12-24：1的质量比制得的。

2.根据权利要求1所述固态发酵生产鼠李糖脂生物表面活性剂的方法，其特征在于，所述步骤1）中，铜绿假单胞菌菌种的接种量为10%；摇床培养的温度为30℃，转速为200rpm，时间为8h。

3.根据权利要求1所述固态发酵生产鼠李糖脂生物表面活性剂的方法，其特征在于，所述液体种子培养基的具体组成为：葡萄糖10g/L，蛋白胨4g/L，酵母粉2g/L，氯化钠1g/L，余量为水，初始pH自然。

4.根据权利要求1所述固态发酵生产鼠李糖脂生物表面活性剂的方法，其特征在于，所述步骤2）中，一级种子液的接种量为10%。

5.根据权利要求1所述固态发酵生产鼠李糖脂生物表面活性剂的方法，其特征在于，所述步骤2）中，培养温度为30℃，通气量为2-3L/min，溶氧保持在30%以上，转速为200rpm，培养时间为8-10h。

6.根据权利要求1所述固态发酵生产鼠李糖脂生物表面活性剂的方法，其特征在于，所述步骤3）中，二级种子液的体积/液态培养基的体积为15%。

7.根据权利要求1所述固态发酵生产鼠李糖脂生物表面活性剂的方法，其特征在于，所述液态培养基的具体组成为：氯化钾1g/L，氯化钠1g/L，磷酸二氢钾3g/L，磷酸氢二钾4g/L，七水硫酸镁0.6g/L，硝酸钠3g/L，棕榈油80g/L，余量为水，pH为6.0-6.5。