[发明专利]小反刍兽疫诊断试剂盒

说明书

本发明涉及小反刍兽疫诊断试剂盒。本发明的检测试剂盒包括基底，以及独立地连接于所述基底上的特定多肽或特定多肽组合。

技术领域

本发明主要涉及兽用诊断试剂盒及诊断方法。具体而言，本发明涉及用 于检测对象生物来源的生物样本中是否存在抗小反刍兽疫病毒的抗体(IgG) 的试剂盒。

背景技术

小反刍兽疫(Peste des petits ruminants,PPR)是由小反刍兽疫病毒(Pestedes petits ruminants virus,PPRV)引起的ー种急性、烈性、接触性传染病， 因其较高的发病率和死亡率，对山羊、绵羊、白尾鹿、野生的瞪羚羊和藏羚 羊等动物具有极大的威胁，是世界范围内公认的烈性传染病，我国也将该病 列为ー类动物传染病。因此，灵敏度高、特异性强的小反刍兽疫诊断方法的 建立就显得尤为迫切。小反刍兽疫病毒(PPRV)属于副粘病毒科 (Paramyxoviriade)麻疫病毒属(Morbollivirus)，同属的其他成员有牛瘟病毒 (RPV)、犬瘟热病毒(CDV)、海豹瘟病毒(PDV)、海豚瘟病毒(DDV)、牛麻疹 病毒(MVKI)和人麻疹病毒(MV)等。PPRV的基因组结构为单股负链、无节段 RNA。目前，小反刍兽疫的诊断方法主要有病毒分离鉴定、抗体血清学检测、 抗原检测等。抗原检测方法有琼脂凝胶免疫扩散(AGID)、对流免疫电泳 (CIEP)、间接荧光抗体试验(IFAT)等方法。抗体血清学诊断常采用OIE推荐 的病毒中和试验(VNT)和竞争ELISA(c-ELISA)。随着分子生物学技术的迅猛发展，PCR技术得到了快速发展。

世界动物卫生组织推荐采用的小反刍兽疫病毒抗体检测方法主要有病 毒中和试验(VNT)和酶联免疫测定(ELISA)。其中，病毒中和试验方法的检测 结果准确，是检测小反刍兽疫病毒的金标准，但该方法检测时间长且不适于 检测大量样本。与此相对，酶联免疫测定的特异性和敏感性较高、检测时间 比病毒中和试验短且适合检测大量样品，因此，被广泛应用于小反刍兽疫病 毒抗体的检测。

用于小反刍兽疫病毒抗体检测的酶联免疫测定方法主要包括竞争酶联 免疫测定(c-ELISA)、阻断酶联免疫测定(b-ELISA)和间接酶联免疫测定(间接 ELISA)。c-ELISA和b-ELISA的特异性和敏感性都比较高，是被临床普遍 接受的小反刍兽疫病毒抗体检测方法，例如国际上通用的法国BIRAD实验 室的小反刍兽疫诊断试剂盒就采用了c-ELISA方法。但是，c-ELISA和 b-ELISA均需使用单克隆抗体，这造成检测成本大幅提高；而且，c-ELISA 和b-ELISA的操作繁琐、检测时间长(虽然相对于VNT已经有所缩短)、判 据复杂。另一方面，传统的间接ELISA使用源自小反刍兽疫病毒的完整蛋 白(例如H蛋白、N蛋白、F蛋白等)或重组蛋白作为包被抗原来检测血清中 的抗体，其成本低于c-ELISA和b-ELISA；但是，由于该方法使用完整蛋白 作为抗原，容易发生抗体的错误识别和非特异性识别，因此，其特异性和敏 感性都不及c-ELISA和b-ELISA。

因此，需要开发出检测成本低、检测时间短、操作简便、特异性和敏感 性高的小反刍兽疫诊断试剂盒。

发明内容

鉴于上述现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种检测成本 低、检测时间短、操作简便、特异性和敏感性高的小反刍兽疫诊断试剂盒， 以及能够用于制备该试剂盒的多肽或多肽组合。

基于抗原表位多肽的间接ELISA方法使用抗原表位多肽(20个氨基酸左 右的单条多肽通常只包含一个抗原表位)作为包被抗原。发明人发现：该方 法的敏感性往往偏低，单条多肽的敏感性一般不会超过50％；而灵敏性高的 多肽，假阳性率也高，即特异性低。如果能够通过某种方式同时提高检测的 特异性和敏感性，就可以克服传统的间接ELISA的缺点，开发出特异性和 敏感性均可媲美c-ELISA和b-ELISA、甚至更高的小反刍兽疫诊断试剂盒。