[发明专利]新重组因子C、其制造方法、及内毒素的测定法

权利要求书

1.一种测定待测试样中的内毒素的方法，所述方法包括：

将包括鲎的因子C蛋白的测定剂与待测试样混合的工序，所述鲎的因子C蛋白，与将Sf9用作宿主细胞所表达的鲎的因子C蛋白相比，具有较多的(α-2,3)键的末端唾液酸；及

测定级联反应的进行的工序，

其中，所述待测试样含有钠离子，和

所述待测试样中的钠离子的含量是来自该待测试样的钠离子的浓度以将该待测试样与所述测定剂混合后的反应体系中的终浓度计达到20mM以上的量；

其中，鲎的因子C蛋白在中国仓鼠的细胞或人的细胞中被表达；和

其中所述中国仓鼠的细胞为CHO，所述人的细胞为HEK293。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述待测试样中的钠离子的含量是来自该待测试样的钠离子的浓度以将该待测试样与所述测定剂混合后的反应体系中的终浓度计达到50mM以上的量。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，该待测试样与所述测定剂混合后的反应体系中的氯化钠终浓度为77mM以上。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其中，在中国仓鼠的细胞或人的细胞中被表达的所述鲎的因子C蛋白在用怀槐凝集素进行凝集素印迹时，与天然因子C蛋白和/或将Sf9用作宿主细胞所表达的鲎的因子C蛋白相比显示出较高的反应性。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其中，在中国仓鼠的细胞或人的细胞中被表达的所述鲎的因子C蛋白在非还原SDS-PAGE中测定的分子量为115kDa～140kDa。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，在中国仓鼠的细胞或人的细胞中被表达的所述鲎的因子C蛋白在非还原SDS-PAGE中测定的分子量为127kDa±5kDa。

7.根据权利要求1或2所述的方法，其中，在中国仓鼠的细胞或人的细胞中被表达的所述鲎的因子C蛋白为下述(A)、(B)、(C)、或(D)所示的蛋白质：

(A)包含序列号2所示的氨基酸序列的蛋白质；

(B)相对于序列号2具有90％以上的同源性或同一性、且具有因子C蛋白的活性的蛋白质；

(C)包含序列号4所示的氨基酸序列的蛋白质；

(D)包含相对于序列号4具有90％以上的同源性或同一性、且具有因子C蛋白的活性的蛋白质。

8.根据权利要求1或2所述的方法，其中，在中国仓鼠的细胞或人的细胞中被表达的所述鲎的因子C蛋白为水溶性。

9.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述中国仓鼠的细胞为CHO DG44。

10.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述待测试样为注射剂。

11.根据权利要求1或2所述的方法，其进一步包括将用于检测级联反应的进行的底物添加至反应体系的工序。

12.根据权利要求1或2所述的方法，其进一步包括计算出待测试样中的内毒素量的工序。

13.根据权利要求1或2所述的方法，其中在中国仓鼠的细胞或人的细胞中被表达的所述鲎的因子C蛋白与天然因子C蛋白相比具有较多的(α-2,3)键的末端唾液酸。