[发明专利]一种氯霉素免疫检测试剂及其制备和检测方法

说明书

本发明公开了一种氯霉素免疫检测试剂及其制备和检测方法。包括：酶标氯霉素、用于检测氯霉素抗体‑酶标氯霉素复合物的指示试剂；上述酶标氯霉素由氯霉素和葡萄糖脱氢酶偶联而成。本发明的氯霉素免疫检测试剂可以精确快速地确定人体血液等样品中氯霉素含量。与市场上现有的检测试剂相比，本发明检测试剂具有方便快速、灵敏度高、特异性强、定量准确等优点，有利于临床的推广使用。

技术领域

本发明涉及医学检验领域，具体是一种氯霉素免疫检测试剂及其制备和检测方法。

背景技术

氯霉素（Chloramphenicol，CAP）是一种应用比较广泛的抗生素，对家禽、家畜、水产养殖动物传染病的预防、控制和治疗起着相当重要的作用。氯霉素因其抗菌消炎作用，对皮肤炎症有一定疗效，因此常被添加在祛痘除螨类化妆品中。但由于人体脸部皮肤柔嫩，黏膜血管丰富，对药物吸收非常快，从而破坏皮肤表面的正常菌群，导致皮疹、速发性过敏等不良反应。同时氯霉素存在严重的副作用，会造成人的再生障碍性贫血、粒细胞缺乏症等疾病。其在动物性食品中的残留也危害着人类的健康，我国和世界上多数国家禁止CAP用于食品动物。

目前检测氯霉素的常用方法有：微生物检测法、色谱分析法、免疫检测法。微生物检测法灵敏度较低；色谱分析法样品前处理麻烦，分析速度慢，费用高；免疫分析法具有快速、灵敏度高、高通量的特点。其中免疫分析方法有酶联免疫法、胶体金免疫层析技术等。其中酶联免疫分析法操作相对繁琐，对操作人员的专业知识要求较高；胶体金免疫层析技术稳定性较差、灵敏度较低等。

本发明采用的方法为均相酶免疫检测法，其优点为：操作简便、快速、灵敏度高、准确性好、适合于自动化，应用广泛，并且用全自动生化分析仪对小分子物质和大分子物质都能高通量快速测定。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术中氯霉素检测过程操作复杂、以及测定准确度低的问题，本发明提供了一种快速、灵敏度高、准确检测出待测样本中氯霉素含量的氯霉素均相酶免疫检测试剂及其制备方法。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种氯霉素免疫检测试剂及其制备和检测方法，其特征在于：酶标氯霉素、用于检测氯霉素抗体-酶标氯霉素复合物的指示试剂；上述酶标氯霉素由氯霉素和葡萄糖脱氢酶偶联而成。

作为本发明进一步的方案，所述指示试剂选自酶试剂，包括：酶标偶联物和酶的底物；上述酶标偶联物包括葡萄糖脱氢酶-氯霉素偶联物；上述酶的底物为葡萄糖。

作为本发明进一步的方案，所述的一种氯霉素免疫检测试剂及其制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）葡萄糖脱氢酶-氯霉素偶联物的制备：氯霉素（CAP）半抗原的制备，葡萄糖脱氢酶（GDH）与氯霉素半抗原偶联，纯化偶联的酶标抗原。

（2）氯霉素均相酶免疫检测试剂的制备：

试剂1的制备：由氯霉素抗体和均相酶底物混合而成；

试剂2的制备：由葡萄糖脱氢酶-抗原偶联物与磷酸盐缓冲液混合而成。

作为本发明进一步的方案，所述的一种氯霉素免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，所述的步骤（1）具体过程为：

1）氯霉素（CAP）半抗原的制备

a. 称取CAP 500-1500 mg和琥珀酸酐200-800 mg加入圆底烧瓶中，加入无水吡啶5-15mL减压蒸馏，收集115℃馏分；

b. 然后55~60℃冷凝回流10-16 h，反应液用旋转蒸发仪蒸去吡啶，得红色糖浆状物A；

c. 加入乙酸乙酯20-100 mL和盐酸5-20 mL，充分振荡，再分离酸层；