[发明专利]检测牛粪便污染的引物及检测试剂盒

说明书

本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种检测牛粪便污染的引物及检测试剂盒。本发明提供的检测引物能够特异性地与牛Faecalibacterium菌反应产生条带，而鸡，鸭，人，狗和猪Faecalibacterium菌不能发生反应，在6个物种中，引物特异性达100％。本发明的引物用于牛Faecalibacterium菌检测时，最低检测限(LOQs)为2490拷贝/μl，灵敏度效果极佳；牛粪便样品的同物种检测，阳性率达93.8％(45/48)，稳定性较好。本发明的检测引物及检测试剂盒用于水体污染检测时，能快速判断水体中是否存在牛粪便污染，并定位污染源。

技术领域

本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种检测牛粪便污染的引物及检测试剂盒。

背景技术

牛是世界上分布最为广泛、存栏量最多的大型牲畜之一，且牛肉也是受众群体最大的肉类品种之一。由于国际市场对牛肉的需求量日益增加、牛肉行情持续紧俏等原因，世界活牛饲养数量呈增长趋势，活牛的存栏数量2010年为10.12亿头，2013年已增至10.27亿头。活牛数量的增多带来的是严重的牛粪便污染问题，其粪便造成的饮用水污染对人体的健康以及自然环境带来极大危害。

大部分肠道传染病可通过水环境传染，但是污染源很难确定。现有的技术不能够区分水源中的几种粪便污染，如果能够解决粪便污染来源的示踪问题，将会对水污染治理有重要意义。传统的示踪微生物大肠杆菌(E.coli)、粪肠球菌属(Enterococcus spp.)、双歧杆菌(Bifidobacterium)、产气荚膜菌(Clostridium perfringens)、普雷沃氏菌(Prevotella)、动物肠道病毒等在水质示踪检测中存在较多局限性，难以准确示踪水体污染程度。水质监测的生物指标无法实时监控水体污染，也无法定位水体污染源。最新的研究表明：Faecalibacterium菌是人和动物肠道中的优势菌群，不同宿主肠道内的Faecalibacterium菌基因上存在显著差异。根据这些基因差异可以区分粪便来源，可极大的弥补传统粪便污染示踪微生物的缺陷。

已有机构利用人类、狗和家禽等肠道内的Faecalibacterium菌16S rRNA基因序列差异性对水中粪便污染来源进行了研究，并确定利用该技术可以区分人源粪便与狗源粪便造成的水污染。然而对于水中可能出现的复杂的粪便污染情况，仅如此区分在水质污染检测中是不够的。

目前，尚无关于牛Faecalibacterium菌的报道，更无针对牛Faecalibacterium菌检测水体中牛粪便污染的方法。

因此开发一种针对牛Faecalibacterium菌检测水体中牛粪便污染的引物对及试剂盒，本发明的引物能够和水体中的牛粪便提取物发生特异结合，实时监测水体污染，并快速准确定水体中的污染源。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种用于牛Faecalibacterium菌检测的引物对，该引物能够和牛Faecalibacterium菌DNA发生特异结合，从而快速判断牛Faecalibacterium菌感染情况。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

一种用于牛Faecalibacterium菌检测的引物对，其序列如SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2所示。