[发明专利]一种快速提高白芨种苗培育数量的白芨种苗组织培养方法

权利要求书

1.一种快速提高白芨种苗培育数量的白芨种苗组织培养方法，其特征在于，按照以下步骤进行：

1)诱导白芨种子萌芽，取种芽并诱导形成白芨愈伤组织；

2)通过白芨愈伤组织培养得到白芨悬浮细胞；

3)使白芨悬浮细胞分植与分化出芽，得到生芽的白芨组培苗；

4)诱导白芨组培苗生根，得到生根的白芨种苗。

2.根据权利要求1所述的快速提高白芨种苗培育数量的白芨种苗组织培养方法，其特征在于，步骤1)中，诱导形成白芨愈伤组织的具体操作方法为：将白芨果的种子取出，置于萌芽培养基中，并在温度25-28℃，相对湿度60-80％，光照时间10-14h/d，光照强度2000-4000Lx条件下培养7-14d；将萌发的种子取出，取种芽并接种于愈伤组织诱导培养基中，在温度25-28℃，相对湿度60-80％，光照时间10-14h/d，光照强度2000-4000Lx条件下培养25-35d。

3.根据权利要求2所述的快速提高白芨种苗培育数量的白芨种苗组织培养方法，其特征在于，萌芽培养基为：改良的1/2MS固体培养基，添加0.8-1.2mg/Kg 6-苄氨基嘌呤、0.2-0.6mg/Kg萘乙酸、20-40g/Kg蔗糖和6.0-8.0g/Kg琼脂；

愈伤组织诱导培养基为：改良的MS固体培养基，添加0.8-1.2mg/Kg 6-苄氨基嘌呤、0.9-1.1mg/Kg 2,4-二氯苯氧乙酸、20-40g/Kg蔗糖和6.0-8.0g/Kg琼脂。

4.根据权利要求1所述的快速提高白芨种苗培育数量的白芨种苗组织培养方法，其特征在于，步骤2)中，培养得到白芨悬浮细胞的操作方法为：将白芨愈伤组织置于悬浮细胞培养基中破碎、分散，并在温度25-28℃，转速90-110r/min条件下振摇暗培养15-25d，得到白芨悬浮细胞。

5.根据权利要求4所述的快速提高白芨种苗培育数量的白芨种苗组织培养方法，其特征在于，悬浮细胞培养基为：改良的1/2MS液体培养基，添加0.1-0.3mg/Kg萘乙酸、0.8-1.2mg/Kg 6-苄氨基嘌呤、1.5-2.5mg/Kg吲哚丁酸、85-110mg/Kg肌醇、0-200mg/Kg磷酸铵、100-300mg/Kg磷酸二氢钾、2500-3500mg/Kg硝酸铵和20-40g/Kg蔗糖。

6.根据权利要求1所述的快速提高白芨种苗培育数量的白芨种苗组织培养方法，其特征在于，步骤3)中，白芨悬浮细胞分植和分化出芽方法为：将白芨悬浮细胞置于分化生芽诱导培养基中，涂布均匀，并在温度23-26℃，相对湿度60-80％，光照时间10-14h/d，光照强度2000-4000Lx条件下培养40-50d，得到生芽的白芨组培苗。

7.根据权利要求6所述的快速提高白芨种苗培育数量的白芨种苗组织培养方法，其特征在于，分化生芽诱导培养基为：改良的MS固体培养基，添加0.9-1.2mg/Kg 6-苄氨基嘌呤、0.4-0.7mg/Kg噻苯隆、20-40g/Kg蔗糖和6.0-8.0g/Kg琼脂。

8.根据权利要求1所述的快速提高白芨种苗培育数量的白芨种苗组织培养方法，其特征在于，步骤4)中，诱导生根方法为：将生芽的白芨组培苗接种至诱导生根培养基中，并在温度25-28℃，相对湿度60-80％，光照时间10-14h/d，光照强度2000-4000Lx条件下培养，得到生根的白芨种苗。

9.根据权利要求8所述的快速提高白芨种苗培育数量的白芨种苗组织培养方法，其特征在于，诱导生根培养基为：改良的1/2MS固体培养基，添加0.5-0.7mg/Kg萘乙酸、50-100g/Kg香蕉汁、100-150g/Kg土豆汁、5-10g/Kg活性炭、20-40g/Kg蔗糖和6.0-8.0g/Kg琼脂。

10.根据权利要求1所述的快速提高白芨种苗培育数量的白芨种苗组织培养方法，其特征在于，还包括步骤5)：将生根的白芨种苗练苗移栽；操作方法为：将步骤4)得到的生根的白芨种苗置于室内适应性生长5-10d；然后取出白芨苗并种于花盆中，置室内，相对湿度60-80％下适应性生长30-50d；然后将白芨苗移栽至大田。