[发明专利]检测SDC2基因甲基化的方法和试剂盒在审
| 申请号： | 201810490724.7 | 申请日： | 2018-05-21 |
| 公开（公告）号： | CN108642180A | 公开（公告）日： | 2018-10-12 |
| 发明（设计）人： | 秦楠;罗海贝;冯俊;王臣;赵然;陈小凤 | 申请（专利权）人： | 上海锐翌生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 北京清亦华知识产权代理事务所(普通合伙) 11201 | 代理人： | 赵天月 |
| 地址： | 200050 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基因甲基化 荧光定量PCR检测 甲基化 试剂盒 待测样本 种检测 检测 基因甲基化检测 检测结果 结直肠癌 提取DNA 肠癌 标记物 酪蛋白 灵敏度 基因 | ||
1.一种检测待测样本中SDC2基因甲基化的方法，其特征在于，包括：
从所述待测样本中提取DNA；
将所述DNA样本进行甲基化处理，得到甲基化处理后的DNA；
以内参基因作为标准，对所述甲基化处理后的DNA进行荧光定量PCR检测，确定检测结果；
其中，在进行所述荧光定量PCR检测时，所述荧光定量PCR检测体系中加入α-酪蛋白。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述内参基因为ACTB基因或者GADPH基因，优选为ACTB基因。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述α-酪蛋白在所述荧光定量PCR检测体系中的浓度为0.1～1mg/mL，优选为0.4mg/mL。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其特征在于，所述α-酪蛋白为牛血清α-酪蛋白。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其特征在于，利用亚硫酸盐对所述DNA进行甲基化处理。
6.根据权利要求1～5中任一项所述的方法，其特征在于，所述待测样本为粪便样本。
7.根据权利要求1～6中任一项所述的方法，其特征在于，分别利用第一特异性引物和第一特异性探针扩增和检测SDC2基因，所述第一特异性引物选自SEQ ID NO:1～SEQ IDNO:10中的至少一组，优选为SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4，
所述第一特异性探针的核酸序列选自SEQ ID NO:11～SEQ ID NO:16，优选为SEQ IDNO:15。
8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，分别利用第二特异性引物和第二特异性探针扩增和检测ACTB基因，所述第二特异性引物选自SEQ ID NO:17～SEQ ID NO:26，优选为SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22中的至少一组，所述第二特异性探针选自SEQ ID NO:27～SEQ ID NO:32，优选为SEQ ID NO:29。
9.一种检测SDC2基因甲基化的试剂盒，其特征在于，包括第一特异性引物和第一特异性探针，所述第一特异性引物选自SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:10中的至少一组，优选为SEQID NO:3和SEQ ID NO:4，
所述第一特异性探针的核酸序列选自SEQ ID NO:11～SEQ ID NO:16，优选为SEQ IDNO:15；
任选地，还包括扩增和检测内参基因ACTB的第二特异性引物和第二特异性探针，
所述第二特异性引物选自SEQ ID NO:17～SEQ ID NO:26中的至少一组，优选为SEQ IDNO:21和SEQ ID NO:22，
所述第二特异性探针选自SEQ ID NO:27～SEQ ID NO:32，优选为SEQ ID NO:29。
10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，还包括α-酪蛋白，优选为牛血清α-酪蛋白。
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