[发明专利]一种特异性靶向识别黑色素瘤耐药细胞的核酸适体与试剂盒

说明书

本发明公开了一种特异性靶向识别黑色素瘤耐药细胞的核酸适体与试剂盒。所述核酸适体序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，该核酸适体均能特异性且高亲和力的靶向识别黑色素瘤耐药细胞株及黑色素瘤耐药细胞裸鼠异体移植瘤。目前，基于黑色素瘤耐药细胞筛选核酸适体尚未有任何报道，利用本发明的核酸适体可为临床耐药黑色素瘤提供一种新的靶向药物呈递载体。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种特异性靶向识别黑色素瘤耐药细胞的核酸适体与试剂盒。

背景技术

皮肤癌是皮肤细胞不受控制地异常增殖从而形成的恶性肿瘤，它是因皮肤细胞的DNA发生了不可修复的损伤（如基因突变，遗传缺陷）而引起。皮肤癌可分为三种类型：基底细胞皮肤癌，鳞状细胞皮肤癌与黑色素瘤（malignant melanoma, MM）。其中虽然黑色素瘤的发生比例仅占各类型皮肤癌的4%，但却是恶性化程度最高的一类，易转移，也是造成皮肤肿瘤相关死亡的主要原因。黑色素瘤在我国的发病率逐年增长，年增长率为3%~5%。大多数早期黑色素瘤患者可通过外科手术治愈，但患者往往术后发生转移，预后差且5年内死亡率高。发生转移的黑色素瘤一般以内科为主的综合治疗包括：①化疗，如：达卡巴嗪、替莫唑胺等；②免疫治疗，如：PD-1抑制剂、CTLA-4抑制剂等；③靶向治疗，如：威罗菲尼、达拉菲尼等；④ 放射治疗。

研究发现≥50%的黑色素瘤患者存在BRAFV600E突变，该突变可导致BRAF蛋白呈持续激活状态，从而引起下游MAPK（mitogen-activated protein kinase）信号通路的持续激活，并最终导致癌细胞的存活与增殖。威罗菲尼（Vemurafenib, Plx4032）是一种特异靶向BRAFV600E的抑制剂，主要用于治疗晚期BRAFV600E突变型的黑色素瘤患者。相比化疗药物，威罗菲尼具有出低毒性、患者耐受性高、快速的临床应答等特点。约100%的患者对药物的持续应答时间有限，中位无进展生存期（Progression free survival, PFS）约为5.1—6.8个月，而造成这一现象的原因在于肿瘤细胞对威罗菲尼产生了耐药。因此，研发新型的针对威罗菲尼耐药黑色素瘤的靶向治疗或靶向药物呈递的策略，对黑色素瘤的治疗具有重大医学意义。

核酸适体（aptamer）在肿瘤早期诊断、治疗及靶向药物呈递等诸多方面具有较大的应用前景。核酸适体是通过模拟自然进化过程的人工筛选技术-指数富集配体系统进化技术（Systematic Evolution of Ligands by Exponential enrichment, SELEX）筛选与扩增得到的具有识别功能的短的单链DNA或RNA分子，能通过折叠形成特定的三维结构与多种类型的靶标高亲和性、高特异性结合，包括有机染料、核苷酸、氨基酸、多肽、蛋白质、细胞、病毒和细菌。核酸适体除能与各种靶标分子高特异性、高亲和力结合外，还具有分子量较小、低免疫原性、易合成、改造与标记、生物化学稳定性好、生物相容性好等多种优势。细胞-SELEX（Cell-SELEX）是在SELEX 基础上发展的一项新的细胞筛选技术，该技术筛选核酸适体是以活性细胞为筛选对象，无需事先了解靶目标的分子特征，能确保目标分子保持天然构象，最大程度保留其生物功能，该技术不仅可用于确定某种疾病或细胞的生物标志物，而且也非常有利于获得具有治疗潜力的核酸适体。到目前为止，基于细胞筛选核酸适体的工作已经在肺癌、肝癌、多发性骨髓瘤和白血病等多种细胞中开展。然而，基于威罗菲尼耐药黑色素瘤细胞株筛选核酸适体尚未有报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种特异性靶向识别黑色素瘤耐药细胞的核酸适体与试剂盒。

为实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案：

一种特异性靶向识别威罗菲尼耐药黑色素瘤的核酸适体，所述核酸适体序列如SEQ ID NO.1所示，命名为核酸适体LL4。所述核酸适体的序列还可以是将核酸适体LL4的5'端9个碱基截去后所得的截短序列，截短序列如SEQ ID NO.2所示，命名为核酸适体LL4A，核酸适体LL4A与核酸适体LL4功能相同。

核酸适体LL4: