[发明专利]检测蟹爪兰X病毒所用PCR引物对、检测方法及其应用

权利要求书

1.一种检测蟹爪兰X病毒所用PCR引物对，其特征在于：包括上游引物SchVX CP-F：5’-GGTCATCACCGGAAACTGT-3’，下游引物SchVX CP-R：5’-CTTTGGGCTTTCAGATCCTT-3’。

2.一种采用如权利要求1所述的PCR引物对检测蟹爪兰X病毒的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：

步骤1.提取待检火龙果样品的总RNA；

步骤2.逆转录；

步骤3.PCR扩增。

3.根据权利要求2所述的检测蟹爪兰X病毒的方法，其特征在于：步骤3中PCR反应体系配制如下：

25μL扩增反应体系如下：

10×PCR缓冲液，2.5μL；

25mmol/L MgCl2，1.5μL；

2.5mmol/LdNTP，2.0μL；

上游引物SchVX CP-F，2.0μL；

下游引物SchVX CP-R，2.0μL；

模板cDNA(1ng/μL)，2.0μL；

Taq DNA聚合酶，0.2μL；

无RNA酶去离子水，12.8μL。

4.根据权利要求2或3所述的检测蟹爪兰X病毒的方法，其特征在于：步骤3中PCR反应条件如下：在PCR热循环仪上设置程序，按程序设置的条件进行扩增：1)94℃预变性5min；2)94℃变性40sec；3)55℃退火50sec；4)72℃延伸50s；循环步骤2)～4)30次；5)72℃延伸8min。

5.根据权利要求2所述的检测蟹爪兰X病毒的方法，其特征在于：对步骤3中PCR反应产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，与阳性对照相比，若待检样品的扩增条带长度与阳性对照一致，则待检样品呈阳性，表明样品中含有蟹爪兰X病毒。

6.根据权利要求5所述的检测蟹爪兰X病毒的方法，其特征在于：将步骤3中待检样品的PCR扩增产物直接连于pMD18-T载体，转化大肠杆菌，挑取阳性克隆进行菌液PCR初步鉴定，对鉴定为阳性的菌株进一步测序，依据测序结果进行比对，确定是否感染蟹爪兰X病毒。

7.一种检测蟹爪兰X病毒所用PCR引物对在检测火龙果、仙人掌及蟹爪兰是否存在蟹爪兰X病毒侵染中的应用。