[发明专利]一种含连接剂的淋巴细胞分离液

说明书

本发明公开了一种含连接剂的淋巴细胞分离液，其中的连接剂为连有粒细胞特异性抗体的不具有细胞毒性的树脂或橡胶。本发明细胞分离液在淋巴细胞分离的过程中，可将粒细胞与其他密度不同的物质带出淋巴细胞层，从而减少淋巴细胞层中被激活的粒细胞的数量，延长最佳分离时间，是一种显著提高人外周血存放时间的淋巴细胞分离液。

技术领域

本发明涉及一种试剂，尤其涉及用于从人外周血中分离提纯PBMC细胞的分离试剂。

背景技术

PBMC(peripheral blood mononuclear cell)，外周血单个核细胞，顾名思义，其主要细胞类型为血液里边具有单个核的细胞，主要包括淋巴细胞(T/B)，单核细胞，吞噬细胞，树突状细胞和其他少量细胞类型。其中淋巴细胞占很大一部分。分离PBMC的主要目的是为了将多核细胞和红细胞去除，从而能够很方便地模拟体外的血液免疫环境。

使用外周血单个核细胞模拟体外的血液免疫环境，可以更方便更安全的进行许多的科研工作与医学工作。因此，从人外周血中分离提纯外周血单个核细胞是许多科研与医学工作重要的基本工作。然而现有的各种淋巴细胞分离液都存在采集到人外周血后需要第一时间分离的问题，限制时间在4-8个小时不等。由于限制时间较短，对无法第一时间从人外周血中分离淋巴细胞的用户造成了极大不便。因此存在延长分离淋巴细胞限制时间的需求。

发明内容

为了解决上述存在的问题，本发明提供了一种含连接剂的淋巴细胞分离液，其可保证人外周血从采集起至多32小时内分离均可获得大量的、高纯度的外周血单个核细胞。其中连接剂不会对分离的性能与效果有任何负面影响。

本发明的目的之一在于提供一种含连接剂的淋巴细胞分离液。

本发明的另一目的在于提供一种从外周血中分离淋巴细胞的方法。

本发明所采取的技术方案是：

一种含连接剂的淋巴细胞分离液，其为在现有淋巴细胞分离液中加入连接剂，使连接剂浓度为5*10⁶～1*10⁸个/ml，即得；

所述连接剂为连有粒细胞特异性抗体的不具有细胞毒性的树脂或橡胶。

进一步的，所述连接剂粒径不超过50μm。

进一步的，所述树脂为不饱和聚酯树脂。

进一步的，所述不饱和聚酯树脂为间苯二甲酸型，并将甲基氧化为羧基用于结合抗体。

进一步的，所述粒细胞特异性抗体为抗CD66b抗体。

进一步的，所述现有淋巴细胞分离液为聚蔗糖与泛影酸的水溶液。

进一步的，上述含连接剂的淋巴细胞分离液的密度介于血浆与血细胞之间、且渗透压与血浆渗透压相同。

上述含连接剂的淋巴细胞分离液在从外周血中分离出淋巴细胞中的应用。

一种从外周血中分离出淋巴细胞的方法，包括以下步骤：将采集的外周血加入上述所述的含连接剂的淋巴细胞分离液中，1200～2500r/min离心，吸取云雾层细胞，加入培养基中，再经300～1200r/min离心，所得沉淀即淋巴细胞。

进一步的，外周血与含连接剂的淋巴细胞分离液的体积比为0.8～1.2：1。

本发明的有益效果是：