[发明专利]一种可溶性表达亚油酸异构酶的重组大肠杆菌及其应用

权利要求书

1.一株可溶性表达亚油酸异构酶的重组大肠杆菌，其特征在于，将编码麦芽糖结合蛋白MBP的基因malE插入至编码亚油酸异构酶PAI的基因pai的上游，然后在大肠杆菌中进行融合表达。

2.根据权利要求1所述的一株可溶性表达亚油酸异构酶的重组大肠杆菌，其特征在于，以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主。

3.根据权利要求1或2所述的一株可溶性表达亚油酸异构酶的重组大肠杆菌，其特征在于，以pET24a为表达载体。

4.构建权利要求1～3任一所述重组大肠杆菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)以编码麦芽糖结合蛋白MBP的基因malE连接至质粒pUC57上得到质粒pUC57-malE，分别用NdeI/XbaI限制性内切酶双酶切pUC57-malE，切下malE基因并切胶回收；

(2)构建含有pai基因的表达载体pET24a-pai；

(3)步骤(1)和步骤(2)的产物在16℃连接反应过夜，得到融合蛋白表达载体pET24a-Mpai；

(4)以步骤(3)得到的融合蛋白表达载体pET24a-Mpai转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态，得到重组大肠杆菌BL21(DE3)(pET24a-Mpai)。

5.权利要求1～3任一所述重组大肠杆菌在生产反10，顺12-共轭亚油酸中的应用。

6.应用权利要求1～3任一所述重组大肠杆菌生产亚油酸异构酶PAI的方法，其特征在于，将重组大肠杆菌BL21(DE3)(pET24a-Mpai)以2％(v/v)的比例接种于含有抗生素的LB培养基中，在37℃、200r/min的摇床中培养3～4h至OD₆₀₀值为0.6～0.8时，加入IPTG至终浓度为0.1mmol/L，再于20℃、200r/min的摇床中诱导培养18h。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，将重组大肠杆菌BL21(DE3)(pET24a-Mpai)以2％(v/v)的比例接种于含有50μg/mL卡那霉素的LB培养基中，在37℃、200r/min的摇床中培养3～4h至OD₆₀₀值为0.6～0.8时，加入IPTG至终浓度为0.1mmol/L，再于20℃、200r/min的摇床中诱导培养18h。