[发明专利]一种防治新型鸡呼肠孤病毒的卵黄抗体及其制备方法

权利要求书

1.一种防治新型鸡呼肠孤病毒的卵黄抗体，其特征在于，所述卵黄抗体含有抗鸡呼肠孤病毒株抗体；所述鸡呼肠孤病毒株的保藏编号为CCTCC NO：V201817。

2.权利要求1所述卵黄抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）用保藏编号为CCTCC NO：V201817的鸡呼肠孤病毒作为疫苗生产毒株，制成灭活疫苗；

（2）用制备的灭活疫苗注射免疫产蛋鸡，制备高免蛋；

（3）由高免蛋收集卵黄，经一次灭活、酸化萃取、二次灭活、粗滤、除菌过滤、浓缩和三次灭活后制备成防治新型鸡呼肠孤病毒的卵黄抗体。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述灭活疫苗由如下方法制备而成：

将保藏编号为CCTCC NO：V201817的鸡呼肠孤病毒接种SPF鸡胚，收集24-120h内死亡鸡胚尿囊液，获得病毒液；将病毒液浓缩至病毒含量≥10^5.0ELD₅₀，浓缩后的病毒液经甲醛灭活，加入Tween-80混合作为水相，以白油、硬脂酸铝和Span-80混合作为油相，将水相和油相按体积比1:1混合，乳化，制得灭活疫苗。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，用制备的灭活疫苗分4次对产蛋鸡进行免疫，每次免疫间隔2周。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述一次灭活具体为：将卵黄液与水按体积比1:(0.5~1.5)混合，搅拌均匀后得到卵黄稀释液，于60~65℃条件下保温25~35min。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述酸化萃取具体为：向卵黄稀释液中加入所述卵黄稀释液体积2.5~3.5倍的醋酸盐缓冲液，搅拌后过滤收集滤液；所述醋酸盐缓冲液的pH值为4.8-5.2。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述醋酸盐缓冲液的pH值为5.0。

8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述二次灭活具体为：向酸化萃取后的滤液中加入辛酸至终浓度3.5~4.5%，搅拌30-120min，搅拌后于2~8℃放置4~8小时；

步骤（3）中，所述除菌过滤具体为：用0.22μm滤膜过滤除菌。

9.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述浓缩具体为：利用30-50KD的PES中空纤维超滤膜在2-8℃条件下进行浓缩，至抗体效价不低于1:512。

10.权利要求1所述的卵黄抗体在制备用于预防和/或治疗新型鸡呼肠孤病毒感染的制品中的应用；所述新型鸡呼肠孤病毒株的保藏编号为CCTCC NO：V201817。

11.保藏编号为CCTCC NO：V201817的鸡呼肠孤病毒在制备治疗由鸡呼肠孤病毒引起的关节炎的卵黄抗体中的应用。