[发明专利]一种瓜氨酸修饰肽抗原组合及其应用

说明书

本发明提供了一种瓜氨酸修饰肽抗原组合及包括瓜氨酸修饰肽抗原组合的组合物。本发明还提供了瓜氨酸修饰肽抗原组合或包括瓜氨酸修饰肽抗原组合的组合物在制备检测抗瓜氨酸修饰肽IgG抗体和/或IgA抗体的诊断工具中的用途。本发明所述的瓜氨酸修饰肽抗原组合用于检测IgG抗体和/或IgA抗体标志物，解决了临床30％的RA患者缺少明确标志物的问题。本发明提供的诊断工具采用新型类风湿关节炎相关生物标志物的自身抗体所对应的抗原组合，检测人血清中自身抗体，具有特异性好、灵敏度高、准确性好、线性范围广、安全、可靠、易操作的优点，尤其适用当前临床CCP2无法检测的阴性类风湿关节炎患者的筛选和诊断。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，具体涉及抗瓜氨酸修饰肽IgG抗体和/或IgA抗体血清学检测技术，特别是涉及瓜氨酸修饰肽抗原、诊断工具或其制备方法及在CCP阴性类风湿关节炎患者自身抗体检测中的应用。

背景技术

类风湿关节炎(RA，Rheumatoid Arthritis)是最常见的全身性自身免疫疾病之一，世界范围约0.5～1％人群罹患此病。RA是系统性自身免疫疾病，患者常伴随关节慢性炎症反应，遭受疾病慢性过程，可导致进行性关节破坏、骨侵蚀、畸形等。类风湿关节炎RA最重要的血清学发现：患者血清中含有特异识别瓜氨酸修饰蛋白的自身抗体。约70％的RA患者血清中含有识别瓜氨酸修饰蛋白自身抗体(ACPA，Anti-citrullinated proteinantibody)，这些瓜氨酸修饰蛋白被称为自身抗原。ACPAs抗体检测是RA诊断金标准重要检测指标。

研究表明抗瓜氨酸修饰蛋白自身抗体的产生伴随RA患者疾病进程，在临床诊断方面，ACPAs对RA患者有很高的特异性和灵敏度，对RA早期患者也有着较高的灵敏度。对于超早期RA患者，其显示临床症状之前，甚至十几年前，就能检测到瓜氨酸自身抗体存在。同时抗瓜氨酸自身抗体对RA患者预后有重要作用，可预测疾病发展状态。75％类风湿关节炎患者确诊1～2年内，会发生不可逆骨关节侵蚀，ACPAs抗体阳性较ACPAs抗体阴性RA患者骨侵蚀程度更严重，ACPAs抗体水平越高，RA患者发病时间越短。

目前临床使用商业化环瓜氨酸肽(CCP，cyclic citrullinated peptide)检测试剂盒作为RA患者辅助诊断检测方法，CCP检测试剂盒可以检测患者血清中抗环瓜氨酸修饰肽自身抗体。第一代瓜氨酸检测试剂盒CCP1，抗原来自丝聚合蛋白原(Profilaggrin)，使用Elisa检测方法，包被丝聚合蛋白原瓜氨酸修饰肽作为抗原，检测患者血清中瓜氨酸修饰蛋白自身抗体。基于CCP1检测试剂盒，开发了CCP2检测试剂盒，对CCP1瓜氨酸修饰肽进行改造，将多肽序列中两个丝氨酸替换为半胱氨酸，合成环瓜氨酸修饰肽即CCP(cycliccitrullinated peptide)，不仅增加了抗原的稳定性，同时也提高了CCP检测的灵敏度和特异性。CCP2商品化检测试剂盒于2002年上市，并迅速广泛的应用于临床检测，现在仍然是RA检测临床最常用金标准。目前至少有六种常见试剂盒，分别来自Axis-Shield(US)、Euro-Diagnostica(The Netherlands)、Euroimmun(Germany)、Inova(US)、Phadia(Sweden/Germany)、Abbott(US)。CCP2检测试剂盒基于同一种CCP2抗原肽，在检测方面有稍许差别，检测灵敏度为66.7％～77.7％，特异性为86.1％～98.8％。