[发明专利]一种提高水稻耐盐能力的方法

权利要求书

1.一种提高水稻耐盐能力的方法，其特征是，抑制水稻中PHYB基因表达，提高水稻耐盐能力。

2.如权利要求1所述的一种提高水稻耐盐能力的方法，其特征是，包括以下步骤：

1)合成水稻PHYB基因高度特异的双链spacer DNA序列，再连接到pOs-sgRNA载体；

2)然后通过LR反应整合在pH-Ubi-Cas9-7双元载体上，获得PHYB基因的CRISPR/Cas9植物表达载体；

3)再利用农杆菌介导的遗传转化方法将PHYB基因的CRISPR/Cas9植物表达载体转化至水稻中，获得耐盐性提高的转基因株系；

4)然后转基因株系和受体水稻进行回交，获得F1代水稻种子；F1代水稻自交后，筛选没有载体序列、只有PHYB基因靶序列变异的转基因纯合株系。

3.如权利要求2所述的一种提高水稻耐盐能力的方法，其特征是，所述步骤1)基因高度特异的双链spacer DNA序列的获取方式为：在水稻PHYB基因外显子区域寻找合适的spacer序列，得到的spacer序列的5’端加上ggca，其互补序列的5’端加上aaac，合成双链spacerDNA序列。

4.如权利要求3所述的一种提高水稻耐盐能力的方法，其特征是，所述基因高度特异的双链spacer DNA序列为：spacer 1、spacer 2；

spacer 1正向序列PHYB-CRISPR-F1：5’-GGCACCACGCCGTGTTCGAGCAGT-3’；

spacer 1互补反向序列PHYB-CRISPR-R1：5’-AAACACTGCTCGAACACGGCGTGG-3’；

spacer 2的正向序列PHYB-CRISPR-F2：5’-GGCAAATAACCTTGAGCCCTACAT-3’；

spacer 2的互补反向序列PHYB-CRISPR-R2：5’-AAACATGTAGGGCTCAAGGTTATT-3’。

5.如权利要求4所述的一种提高水稻耐盐能力的方法，其特征是，所述步骤1)双链spacer DNA序列接到pOs-sgRNA载体，具体为：采用BsaⅠ酶切pOs-sgRNA载体，回收线性pOs-sgRNA载体，然后用T4连接酶连接spacer1或spacer 2片段和回收的线性pOs-sgRNA载体。

6.如权利要求1所述的一种提高水稻耐盐能力的方法，其特征是，所述步骤3)的水稻为盐丰47栽培水稻。