[发明专利]胆囊癌诊断和预后判断标志物PIM1

说明书

本发明公开了胆囊癌诊断和预后判断标志物PIM1，还公开了胆囊癌诊断和预后判断的试剂盒，其可用于诊断、预测、检测或筛查人胆囊癌细胞扩散、胆囊癌临床分期或胆囊癌患者预后。本发明还公开了PIM1蛋白抑制剂在制备抗胆囊癌药物中的用途。本发明表明PIM1在临床实践中有非常重要的意义，有可能成为新一代的肿瘤生物诊断标志物和用于肿瘤治疗的分子靶标，开辟了以PIM1为主的胆囊癌疾病全新靶标的研究，也为研制抗肿瘤新药开辟新的途径。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及胆囊癌标志物。

背景技术

胆囊癌(gallbladder cancer，简称GBC)是胆道恶性肿瘤最常见的形式，占胆道恶性肿瘤的80％-95％。在过去的几十年中，胆囊癌治疗策略未取得实质性进展，且因缺乏典型症状，早期诊断率仅有19.1％，多数患者明确诊断时已处于中晚期阶段。目前为止，手术切除仍然是胆囊癌患者的主要治疗方法，然而手术切除并不适合晚期患者。胆囊癌对放疗、化疗等治疗措施均不敏感，故整体预后极差，国外流行病学研究表明胆囊癌术后5年生存率仅5％。除此之外，术后易复发或者转移很大程度上决定了晚期胆囊癌的不良预后。据报道，胆囊癌的发生是由复杂的遗传因素及环境因素造成的，然而，胆囊癌进展的分子机制尚不清楚。因此，探究用于确诊胆囊癌的早期检测的生物标志物和有效治疗策略是至关重要的。

PIM家族，包括PIM1，PIM2和PIM3，它们都包含一个被称为ATP锚的活化位点,属于钙/钙调蛋白调节激酶,在多细胞组织的进化过程中高度保守。PIM1基因最早是作为莫洛尼小鼠白血病病毒的前病毒插人点而被发现的。然而，PIM1在胆囊癌中的表达水平和功能作用尚不清楚，这需要更多的研究。

发明内容

本发明旨在解决现有技术中存在的技术问题。

为了探究胆囊癌中PIM1的表达水平，我们采用了组织芯片技术和免疫组织化学技术，探究胆囊癌组织及邻近的癌旁组织标本中PIM1蛋白表达水平，并通过蛋白印迹技术在胆囊癌组织及胆囊癌细胞中对结果进行进一步验证。在蛋白水平探究PIM1的表达结果显示，胆囊癌中PIM1表达显著高于癌旁组织。

为进一步探究PIM1的表达和胆囊癌临床特征及预后之间的关系，本发明人证实了PIM1在TNM分期为III—IV期的样本中表达水平显著高于I—II期样本；本发明人还证实了PIM1在肿瘤发生远处转移的样本中表达水平显著高于肿瘤未发生远处转移的样本，本发明证实PIM1分子可以用于制备、预测、筛查人胆囊癌扩散、肿瘤临床分期的试剂盒。

本发明人还进行Kaplan-Meier生存分析，结果显示PIM1基因高表达组患者生存时间显著短于PIM1基因低表达患者，患病期间PIM1表达的增加与胆囊癌的临床预后存在着密切的相关性。PIM1表达可以作为胆囊癌预后生存时间的参考判断指标及预后生存风险预测参考。

为了进一步探究PIM1基因在胆囊癌发生发展中的作用，本发明人采用PIM1干扰RNA及PIM1特异性抑制剂SGI-1776，分别抑制PIM1在胆囊癌细胞中的表达，分析对胆囊癌细胞增殖、迁移、侵袭及细胞凋亡的影响，本发明人证实抑制PIM1表达，胆囊癌细胞增殖、迁移、侵袭能力显著降低，细胞凋亡显著增加，胆囊癌标志物PIM1还可作为筛选制备诊断、缓解或治疗胆囊癌的药剂的分子靶标。

本发明还应用慢病毒敲除的PIM1的GBC-SD细胞接种至裸鼠皮下，证实了抑制PIM1表达对胆囊癌细胞体内成瘤能力的影响，本发明人发现PIM1敲除的实验组与不进行敲除的对照组相比，肿瘤体积、荧光表达显著降低，本发明再次证明胆囊癌标志物PIM1还可作为筛选制备诊断、缓解或治疗胆囊癌的药剂的分子靶标。第一方面，本发明公开了人PIM1蛋白，作为胆囊癌诊断和/或预后判断标志物的用途。