[发明专利]不同咖啡萃取方式特征标志物及其筛选方法与应用

权利要求书

1.不同咖啡萃取方式特征标志物的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）按咖啡样品的萃取方式分组得到标准样品；

2）对各组标准样品进行液相色谱-质谱联用分析；

3）对所得数据进行统计分析，得到各组标准样品中的差异物质；

4）表征所述差异物质的结构；

步骤1）中，称取每个咖啡粉样品每份2.0±0.001 g按照质量比1:30的料液比，分别制备不同冲泡方式的咖啡样品，咖啡样品经0.45 μm滤膜过滤即得待测标准样品；

在步骤2）中，所述液相色谱为超高效液相色谱；进行所述超高效液相色谱时，以流动相A和流动相B进行梯度洗脱；正离子模式流动相A为0.15 v/v％~0.25 v/v％的甲酸水溶液，流动相B为乙腈；负离子模式流动相A为1.5mM~2.5mM的乙酸铵，流动相B为0.15 v/v％~0.25v/v％的甲酸水溶液；所述梯度洗脱的程序为：0~8min 时，流动相B 0 v/v %~40 v/v %；8~12min时，流动相B 40 v/v %~100 v/v %；12.1min时，0％B；而后以此条件运行1.5~2.5min；所述梯度洗脱的流速为0.2~0.4 mL/min；

在步骤2）中，所述质谱为四级杆/飞行时间高分辨率质谱；

所述四级杆/飞行时间高分辨率质谱的条件选自条件①～④中的至少一个：

①正离子模式和负离子模式的毛细管电压分别为3000v和3500v，喷嘴电压分别为1500v和200v；

②正模式和负模式的干燥气和鞘流气温度和流速分别为250℃，7L/min和325℃，11L/min，Nebulizer压力为35psig；

③全扫描质量轴范围为100–1700Da，Acquisition Rate 2 spectra/s，AcquisitionTime 5000 ms/spectrum；

④所有提取的质量数窗口设置为15.0ppm，保留时间窗口设置为0.15min，噪音设置为300 counts；

其中上述条件①～④中涉及的各个数值参数的浮动范围为该数值参数±10％；

在步骤3）中，所述统计分析的方法包括：

a）对所有的数据进行色谱峰提取和峰对齐，得到每个标准样品的总离子流色谱图；

b）对所述总离子流色谱图中的绝对峰面积进行下列分析：

b1）T-test检验，选出P-Value＜0.05的组份；

b2）变化倍数分析，筛选出FC≥2的差异组分；

b3）绘制各组潜在特征标志物的变量重要性投影图，筛选VIP＞1的差异物质；和/或；绘制各组所述潜在特征标志物的维恩图，得到各组非交集的差异物质。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤1）中，每组标准样品中含有多个不同产地的咖啡粉。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在步骤a）之后，b）之前还包括：

采用主成分分析方法对每组标准样品的初步特征标志物的质核比数据进行分析以初步判断不同萃取方式是否存在差异特征标志物。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在步骤4）中，表征所述差异物质的结构的方法为质谱法，质谱条件同权利要求1的步骤2）。

5.权利要求1~4任一项所述方法筛选得到的特征标志物在鉴别咖啡萃取方式中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述咖啡萃取方式包括：

煮制咖啡、冰镇咖啡、冷萃咖啡、冰滴咖啡、手冲咖啡；或上述方法中的两种或多种萃取方法的组合。