[发明专利]一种从大枣中提取与分离环磷酸腺苷的方法

权利要求书

1.一种从大枣中提取与分离环磷酸腺苷的方法，其特征是：该方法包括如下步骤：

(一)将无霉变枣去核经液氮冷冻后粉碎，按料液比1∶25-35加入超纯水，用盐酸调节水溶液至pH 2.5-3.5，于90-100℃下水浴加热45-55min，离心取上清液，重复提取一次，合并两次上清液，得到环磷酸腺苷浸提液A。

(二)用氢氧化钠调节上清液pH至10.0-12.0，于室温下静置50-60min，得浸提液B。

(三)用盐酸调节静置后的上清液pH至4.0-4.5，按照V(上清液)∶V(CaCl₂溶液)＝10∶1加入CaCl₂溶液，室温下静置30-40min，在9000rpm离心10min后，收集上清液，得浸提液C。

(四)将大孔树脂用超纯水冲洗，洗至上清液无浑浊、无细碎树脂，用4％NaOH溶液浸泡6h，用超纯水冲洗至中性，用4％盐酸溶液浸泡6h，用超纯水冲洗至中性；最后用95％乙醇溶液浸泡24h，过滤掉滤液，用超纯水冲洗树脂至流出液无明显醇味。

(五)采用H103型大孔吸附树脂对cAMP粗提液C进行柱层析试验，工艺参数：上样液pH4.0-5.0，上样液浓度20-30μg/mL，上样液流速2mL/min，采用30％乙醇溶液进行洗脱，洗脱流速为1-2mL/min。

(六)对环磷酸腺苷浸提液以及钙凝胶处理后的粗提液中果胶进行提取，并采用NicoletiS5傅里叶变换红外光谱仪对果胶酯化度进行测定，方法为：精确称取1mg干燥样品与0.1g溴化钾，混合研磨均匀，制成透明压片，采用NicoletiS5傅里叶变换红外光谱仪于400-4000cm^-1范围内进行光谱扫描。