[发明专利]一种荧光标记大分子季铵盐及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种荧光标记大分子季铵盐的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）改性荧光素的合成：在有机溶剂A中加入荧光素，然后在惰性气体气氛中加入氯乙酰氯进行反应，反应结束，经产物纯化，得到改性的荧光素；

（2）荧光标记大分子季铵盐的制备：将物质A和改性荧光素溶于有机溶剂B，在惰性气体气氛中反应；再加入氯化苄，在惰性气体气氛中反应，反应结束，经产物纯化，得到荧光标记的大分子季铵盐；

所述的物质A为硅氧烷与甲基丙烯酸二甲氨基乙酯的两嵌段共聚物或聚二甲氨基丙基甲基丙烯酰胺；

所述的硅氧烷与甲基丙烯酸二甲氨基乙酯的两嵌段共聚物通过如下步骤制备得到：

1）乙烯基封端的聚二甲基硅氧烷聚合物的合成：在有机溶剂C中加入六甲基环三硅氧烷，在惰性气体气氛中，以正丁基锂引发聚合反应，最后加入二甲基乙烯基氯硅烷终止聚合反应；对反应得到的产物纯化，得到透明油状液体产物，为乙烯基封端的聚二甲基硅氧烷；

2）羟基封端的聚二甲基硅氧烷的合成：将有机溶剂D、巯基乙醇、步骤1）得到的乙烯基封端的聚二甲基硅氧烷和催化剂混合，得到澄清的溶液，用紫外光引发自由基加成反应，对反应得到的产物纯化，得到羟基封端的聚二甲基硅氧烷；

3）端基带溴的聚二甲基硅氧烷合成：在有机溶剂E中加入步骤2）得到的羟基封端的聚二甲基硅氧烷、三乙胺和2-溴异丁酰溴混合反应；对反应得到的产物纯化，得到端基带溴的聚二甲基硅氧烷；

4）聚硅氧烷和聚甲基丙烯酸二甲氨基乙酯两嵌段共聚物的合成：将有机溶剂F、步骤3）得到的端基带溴的聚二甲基硅氧烷、甲基丙烯酸二甲氨基乙酯、CuBr和N, N, N', N'',N''-五甲基二乙烯基三胺混合，在惰性气体气氛中经行聚合反应，对反应得到的产物纯化，得到淡黄色粘稠液体产物，即硅氧烷与甲基丙烯酸二甲氨基乙酯的两嵌段共聚物。

2.根据权利要求1所述的荧光标记大分子季铵盐的制备方法，其特征在于：

步骤（1）中所述的氯乙酰氯的摩尔用量按荧光素：氯乙酰氯=摩尔比1：（1～1.3）配比计算；

步骤（1）中所述的有机溶剂A为丙酮；

步骤（1）中所述的反应的时间为8 h；

步骤（2）中所述的有机溶剂B为甲醇和无水乙醇中的一种或两种；

步骤（2）中所述的反应条件为于50～80 ℃冷凝回流反应12～36 h。

3.根据权利要求1所述的荧光标记大分子季铵盐的制备方法，其特征在于：

步骤（1）中所述的有机溶剂A的体积用量相当于荧光素质量的80～150倍；其中，体积用量的单位为mL，质量的单位为g；

步骤（1）中所述的氯乙酰氯的加入方式为滴加加入；

步骤（1）中所述的纯化的步骤为：将产物过滤，然后将得到的粉末放在真空烘箱中50℃烘干，得到的橙黄色粉末为改性后的荧光素；

步骤（2）中所述的纯化步骤为：减压蒸馏出部分醇，加入大量无水乙醚，然后倒掉上清液，再放入50 ℃真空烘箱烘干，即得荧光标记的大分子季铵盐。

4.根据权利要求1所述的荧光标记大分子季铵盐的制备方法，其特征在于：

所述的聚二甲氨基丙基甲基丙烯酰胺通过如下步骤制备得到：将二甲氨基丙基甲基丙烯酰胺和偶氮二异丁腈在甲醇中反应，得到聚二甲氨基丙基甲基丙烯酰胺。