[发明专利]一种高活性卵类粘蛋白的分离方法有效
申请号: | 201810501744.X | 申请日: | 2018-05-23 |
公开(公告)号: | CN108676089B | 公开(公告)日: | 2020-10-23 |
发明(设计)人: | 麻小娟;梁汭;幸黔鲁;黄厚今;胡斌丽;李岩 | 申请(专利权)人: | 遵义医科大学 |
主分类号: | C07K14/81 | 分类号: | C07K14/81;C07K1/16;G01N33/68;G01N21/31 |
代理公司: | 遵义市创先知识产权代理事务所(普通合伙) 52118 | 代理人: | 刘创先 |
地址: | 563000 贵*** | 国省代码: | 贵州;52 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 活性 卵类粘 蛋白 分离 方法 | ||
1.一种高活性卵类粘蛋白的分离方法,其特征步骤为:
1)、鸡蛋清处理液的制备:新鲜鸡蛋去壳并分离出蛋清,加入等体积蒸馏水后置于冰浴中,用玻璃棒缓慢搅拌直到胶状部分消失;用2M HCl调pH到6.0,冰浴中搅拌3h后,离心除去球蛋白等干扰蛋白;上清液继续滴加2M HCl调至pH3.8, 冰浴中搅拌3h,再次离心,将上清液分装成5 ml每管冻存备用;
2)、层析分离:用醋酸-醋酸钠 pH4.7 平衡CM-sepharose FF层析柱 1.5×20cm,至紫外监测仪读数稳定;上样5ml鸡蛋清处理液,控制流速在1.5ml/min,继续用pH4.7的醋酸盐缓冲液进行洗脱,同时连通记录仪,洗脱结束后收集蛋白样品;
3)、蛋白纯度检测:将分离所得蛋白收集,取样10μl与10μl上样缓冲液混合后,取15μl加入聚丙烯酰胺凝胶 SDS-PAGE 胶孔内,电泳后,凝胶经考马斯亮蓝显色;
4)、蛋白质的浓缩:将收集到的卵类粘蛋白纯品用PEG浓缩,透析后冻干,于-20℃冻存。
2.根据权利要求1所述的高活性卵类粘蛋白的分离方法,其特征是:所述步骤3)中,聚丙烯酰胺凝胶 SDS-PAGE为12%分离胶,5%浓缩胶。
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