[发明专利]一种抗CD3和EpCAM双特异性抗体及其在治疗肺癌中的应用

说明书

本发明公开了一种抗CD3和EpCAM双特异性抗体及其在治疗肺癌中的应用。本发明提供了一种抗CD3和抗EpCAM双特异性抗体，将抗CD3单链抗体与抗EpCAM单链抗体连接，得到的抗体。本发明采用具有靶向性和特异性的抗CD3、抗EpCAM双特异性抗体作为活化的T细胞和肿瘤细胞结合的桥梁，增强效应T细胞抗肿瘤效应和机体的肿瘤免疫应答。本发明提供的抗CD3、抗EpCAM双特异性抗体分子片段可在体外构建，由抗CD3单链抗体和抗Ep‑CAM单链抗体通过不影响其作用位点的特定linker连接起来，结合的灵敏度高，亲和力大，能同时结合两种抗原表位。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种抗CD3和EpCAM双特异性抗体及其在治疗肺癌中的应用。

背景技术

肺癌是发病率和死亡率增长最快，对人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。近50年来许多国家都报道肺癌的发病率和死亡率均明显增高，男性肺癌发病率和死亡率均占所有恶性肿瘤的第一位，女性发病率占第二位，死亡率占第二位。在人类同肺癌做斗争中，人们不断探索新的治疗方法。1961年Nisoneff和Rivers发现了双特异性抗体(bispecific antibody,BsAb),近年来由于双特异性抗体的特异性和多功能性，在肺肿瘤的免疫治疗中逐渐发挥着越来越重要的作用，已成为肿瘤新型免疫治疗的主要研究方向之一。既往的肿瘤免疫治疗方法通常包括肿瘤疫苗，IL-2，LAK细胞，DC-CTL,CIK细胞，TIL细胞,NK细胞以及CAR-T细胞。它们主要缺点是免疫因子或者杀伤细胞缺乏，风暴对肿瘤细胞的选择性识别能力以及神经细胞毒性，因而临床上难以取得理想疗效。完美的免疫治疗技术应该是免疫效应细胞能选择性的识别肿瘤细胞而发挥特异性的细胞毒性作用。BsAb的特点是同一个抗体分子上的两个抗原结合点可识别不同的抗原，两条抗原结合臂，一条与靶抗原结合，另一条与免疫效应细胞上的标志抗原结合，二后者结合能激活免疫效应细胞，使其靶向杀灭肿瘤细胞。因此抗肿瘤细胞抗原和抗免疫效应细胞表面抗原组成的BsAb除了能选择性的识别肿瘤细胞外，还能经循环血液中的免疫效应细胞再导向至肿瘤细胞，从而诱导免疫杀伤细胞对肿瘤细胞发挥强大的细胞毒性作用，最终杀灭肿瘤细胞。

在1979年，上皮细胞粘附分子(EpCAM)最初被描述为人类结肠癌的显性表面抗原。由于其在许多癌中的流行，它被“发现”了许多不同的时间。因此，EpCAM有许多别名，其中最著名的有TACSTD1(肿瘤相关的钙信号传感器)、CD326和17-1a抗原。EpCAM是一种跨膜糖蛋白，介导了上皮细胞内Ca2+独立的同型细胞粘附。EpCAM还参与细胞信号传导，迁移，增殖和分化。EpCAM是在各种各样的人类上皮组织、癌、祖细胞和干细胞中表达的。EpCAM在癌中经常被上调，但在非上皮性癌中没有表达。在癌细胞中，EpCAM在细胞膜上以分散的模式表达。然而，在癌中EpCAM的表达通常是异质的；肿瘤中的一些细胞比同一肿瘤中的其他细胞有更多的EpCAM。此外，EpCAM通过其upregulate c-myc、E-fabp和cyclinsA&E的能力具有致癌潜力。所有这些都指向EpCAM作为各种癌症的诊断工具的效用。由于EpCAM仅在上皮细胞和上皮性肿瘤中表达，EpCAM可作为各种癌症的诊断标志物。它似乎在肿瘤的肿瘤发生和转移中起作用，因此它也可以作为潜在的预后标志，并作为免疫治疗策略的潜在靶点。

肺癌是导致癌症相关死亡的主要原因，大约85％的肺癌病例是非小细胞肺癌(NSCLC)。虽然系统治疗有所改善，但5年的总生存率仅为10-20％。低存活率的主要原因是肿瘤细胞的远处转移。在转移级肿瘤中，循环肿瘤细胞(CTCs)被认为是形成远处转移的关键因素。有研究表明，在第四期NSCLC患者中上皮细胞粘附分子(EpCAM)是可在CTC表面检测得到，是该疾病的一个新的预后因素。