[发明专利]检测NDRG4基因甲基化位点的产品在制备结直肠癌早期检测的产品的用途

说明书

本发明公开了一种基于NDRG4基因甲基化序列的结直肠癌早期检测方法，通过检测NDRG4基因启动子区的一段甲基化序列是否发生甲基化，辅助诊断早期结直肠癌；检测方法为从组织、粪便样本中提取DNA，经亚硫酸氢盐处理后，进行实时定量PCR测定，通过计算目标基因NDRG4与内参基因B2M的扩增Ct比差值是否在判定临界值内，判断甲基化水平；这样的检测方式无创，可用于早期结直肠癌的辅助诊断。

技术领域

本发明涉及生物技术及疾病检测领域，特别是一种检测NDRG4基因甲基化位点的产品在制备结直肠癌早期检测的产品的用途。

背景技术

结直肠癌(Colorectal Cancer，CRC)是全球第四大男性常见癌症，是全球第三大女性常见癌症，在发达国家的发病率最高。CRC影响约5％的美国人群，在癌症相关死亡率中排名第二。近年来，随着我国人民生活水平的提高，生活习惯与饮食结构的改变，环境污染日益严重，我国结直肠癌的发病率不断增加。国家癌症早诊早治项目专家委员会2013年的研究报告指出，我国40岁以上的高危人群患进展期腺瘤和早期肠癌的比率为6％。据2015年《中国肿瘤登记年报》统计，结直肠癌的发病率近年来仍在增长。目前我国每年新增结直肠癌确诊病例44万，每年死亡患者多达23万人。

结直肠癌主要包括结肠癌与直肠癌两大类，其发展是一个渐进过程：增生>小腺瘤>大腺瘤>重度非典型增生>早期腺癌>晚期腺瘤。大多数肠癌形成之前以息肉(异常突起)或腺瘤(腺上皮良性肿瘤)的形式在发病部位缓慢发展多年，在此期间患者无任何不适。随着时间的推移，部分腺瘤可转变为癌症。在癌变过程中，肿瘤细胞侵入肠壁，与血管或淋巴管融合，通过吸收患者养分迅速扩增。后期，癌细胞通过淋巴管侵入附近的淋巴结或身体的其它器官，形成癌扩散。结直肠癌在早期并没有明显症状，通常发展至晚期才有明显症状显现，如腹痛，便血等。

结直肠癌的生存率依赖于诊断时的病理分期。如果在早期阶段(局限于肠壁)被诊断，患者的5年生存率能达到90％；如果在发生淋巴结转移阶段被诊断，患者的5年生存率下降到65％；如果在远端转移阶段被诊断，患者的5年生存率则只有9％。

目前，结直肠癌的筛查方法主要有结肠镜检查与粪便潜血试验。纤维结肠镜是迄今为止最准确的结直肠癌筛查方法，肠镜加病理活检被认为是结直肠癌筛查和诊断的金标准。在美国和欧洲的有些国家，纤维结肠镜被广泛应用于结直肠癌的筛查，50岁以上的人每10年被要求做一次肠镜，但因肠镜的侵入性和肠道准备时的不适以及可能会出现并发症，有超过半数的美国人不愿意接收肠镜检查，使得实际进行结肠镜检查的病人很低。粪便潜血试验是唯一被应用于结直肠癌大系列人群筛查且得到循证医学证实可有效降低死亡率的方法。其以粪便中血红蛋白为检测靶标，相对其他方法，能做到无创检测，不需要肠道准备，取材方便，检测费用相对便宜。但粪便潜血试验也存在很多弊端，如肿瘤伴随的出血症状可能出现暂停或肿瘤早期无出血症状而造成漏检，影响对肿瘤尤其是早期病变的检测灵敏度。

此外，我国大多数患者缺乏癌症早期筛查的意识，由于疾病早期症状不明显，发现明显症状后才到医院进行检查，至被确诊为结直肠癌时，癌细胞已经扩散，错失最佳的治疗时间。中晚期患者所需治疗费用高、疗效差、五年生存率低。如果能够在早期发现结直肠癌，不仅治疗费用低，还可达到预防甚至治愈的目的，因此亟待开发更好的结直肠癌筛查方法。

基因启动子区CpG岛的超甲基化与基因的沉默相关，可能使抑癌基因失活。文献报道(Melotte et al.(2009))NDRG4(N-Myc Downstream-Regulated Gene 4)是结直肠癌的一种抑癌基因，其表达往往通过启动子区的甲基化而失活。若能够寻找到与结直肠癌发生相关的甲基化位点，就可以用于早期结直肠癌的辅助诊断。