[发明专利]一种HBcAg的表达纯化方法在审
| 申请号： | 201810503875.1 | 申请日： | 2018-05-23 |
| 公开（公告）号： | CN108659107A | 公开（公告）日： | 2018-10-16 |
| 发明（设计）人： | 许德晨;景宏维;黄力 | 申请（专利权）人： | 基蛋生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/02 | 分类号： | C07K14/02;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18;C12N15/81 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) 11371 | 代理人： | 李佳 |
| 地址： | 210000 江苏省南京*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 转化子 乙肝病毒核心抗原 硫酸铵分级沉淀 阴离子交换层析 基因工程领域 酵母表达载体 体外诊断试剂 核苷酸序列 特异性诊断 扩大培养 细胞破碎 诱导表达 感受态 活性高 线性化 超滤 得率 透析 转染 酵母 蛋白 | ||
1.一种HBcAg的表达纯化方法，其特征在于，包括：
将含有表达HBcAg的核苷酸序列的酵母表达载体线性化并转染感受态酵母得到转化子；
对所述转化子扩大培养、诱导表达后将细胞破碎、离心后收集上清；将所述上清经硫酸铵分级沉淀及阴离子交换层析，经超滤透析后得到纯化好的HBcAg蛋白。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述含有表达HBcAg的核苷酸序列为SEQID NO:1。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，含有表达HBcAg的核苷酸序列的酵母表达载体为HBcAg的多拷贝载体，优选为四拷贝载体。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述酵母表达载体为PA0815载体。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述酵母为毕赤酵母；优选为毕赤酵母GS115。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述诱导表达的条件包括：
将所述转化子接种于BMGY培养基培养至OD600＝0.8～1时，每隔10h～14h补加0.4v/v％～0.6v/v％的甲醇，连续诱导3～5天。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述硫酸铵浓度为17％～18.2％。
优选的，所述硫酸铵分级沉淀的操作包括：在硫酸铵加入之后，2℃～6℃静置1.5h～2.5h后，于2℃～6℃温度下8000rpm～12000rpm离心20min～40min 收集沉淀。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述阴离子交换层析为DEAE柱。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超滤透析具体为用100kD超滤管超滤。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述超滤透析所用透析缓冲液为15mM～25mM的磷酸盐缓冲液，pH 7.2-7.6；优选为20mM磷酸盐缓冲液，pH 7.4。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于基蛋生物科技股份有限公司，未经基蛋生物科技股份有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201810503875.1/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
